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背景与目的：非小细胞肺癌（Non—small cell lung cancer，NSCLC）位居癌症死亡的首位，在发达国家的5年生存率约15％，发展中国家的5年生存率约9％。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor，EGFR TKI）是继手术、放疗和化疗之后出现的又一治疗手段。EGFR TKI对部分NSCLC十分有效，但这部分病例最终都会出现继发耐药。明确的耐药机制仍未阐明。本研究为了探讨中国NSCLC人群对EGFR TKI的耐药机制，对EGFR、KRAS、c—MET以及肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）等四个靶点进行研究，分析它们的特点与在耐药中的意义。
材料与方法：以没有TKI治疗过的NSCLC手术后病例作为基线人群，对一组共31例EGFR TKI治疗耐药后的NSCLC进行研究。分别用直接测序法（Direct sequencing）与蝎形探针扩增阻滞突变系统（Scorpions amplification refractory mutation system，ARMS）检测EGFR基因酪氨酸激酶区（18～21外显子）的敏感突变及耐药突变，分析突变与疗效预后的关系；用Affymetrix Human Genome U133 Plus2.0 Array基因芯片比较3例含T790M突变NSCLC与6例EGFR敏感突变NSCLC之间的全基因组表达变化；用直接测序法与KRAS突变试剂盒（KRAS mutation test kit）检测KRAS基因第12、13、59和61位密码子的突变；用实时荧光定量PCR TaqMan探针法检测c—MET基因的拷贝数；用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测HGF对Gefitinib细胞毒作用的影响；用免疫组化方法检测肝细胞生长因子在耐药后NSCLC中的表达水平。
结果：在耐药病例中直接测序法共检测到48.4％有EGFR敏感突变（15/31）与25.8％有T790M突变（8/31）。ARMS方法检测出85.7％有敏感突变（24/28），51.6％有T790M突变（16/31）。两种方法在EGFR敏感突变检出率上差别有统计学意义（Fisher精确概率法，P=0.0029）；在检测T790M突变时ARMS方法也比直接测序法敏感（卡方检验，P=0.037）。所有T790M突变都在耐药后的标本中检出，其中1例为单独存在的T790M突变。EGFR敏感突变丰度高的病例（仅在直接测序法检测到）对TKI的无进展生存期（Progression free survival，PFS）长于敏感突变丰度低的病例（直接测序未能检出，但被ARMS法检出）（P=0.012）。与高丰度T790M突变的病例相比，低丰度T790M突变的PFS较短（P=0.0028）。
EGFR T790M突变与敏感突变之间的全基因组表达差异主要有细胞凋亡、细胞增殖与肿瘤转移三个方面，包括XAF1、BCL2、BCL2L12、HSP60、HSP10、ADAM9与MET等基因。在没有TKI治疗过的NSCLC病例中KRAS基因突变率为7.6％（10/132），在吸烟人群中突变率高于非吸烟者。在TKI耐药后NSCLC中，直接测序法与ARMS方法均未发现KRAS基因突变。
在基线人群中3.8％（2/53）有c—Met基因扩增；耐药后的NSCLC中16.1％（5/31）有c—Met基因扩增。两组之间差异接近有统计学意义（Fisher精确概率法，P=0.095）。治疗前或治疗后检出的c—Met基因扩增在临床病理因素方面没有明显差异。c—Met基因扩增在EGFR敏感突变或野生型NSCLC中均可出现，有2份耐药后的标本被证实c—Met基因扩增合并EGFR T790M突变。
外源性HGF没有影响Gefitinib对EGFR野生型NSCLC细胞的杀伤作用。17.4％（4/23）耐药后NSCLC为HGF阳性表达。阳性病例均为EGFR19外显子缺失突变NSCLC，其中3例同时合并T790M突变。HGF高表达的病例没有合并c—Met基因扩增。所有HGF阳性病例对TKI耐药后的进一步治疗均无反应。
结论：
1、51.6％（ARMS法）对TKI耐药的中国非小细胞肺癌与继发EGFR T790M突变有关。
2、继发性EGFR T790M突变可能独立于敏感突变而存在。
3、EGFR基因突变丰度不同的NSCLC其无进展生存期不同。
4、EGFR T790M突变引起与细胞凋亡、细胞增殖及转移相关的分子出现变化。
5、中国NSCLC中KRAS基因的突变率为7.6％，与TKI继发耐药无关。
6、16.1％中国NSCLC对EGFR TKI耐药与c—MET基因扩增有关。TKI治疗前出现的c—MET基因扩增与药物诱导出的c—MET基因扩增具有相似的临床病理特点。
7、HGF仅参与EGFR敏感突变NSCLC对TKI的耐药机制，并可以和EGFR T790M突变合并出现。