论文部分内容阅读
目的:通过不结扎输尿管直接膀胱注射大肠杆菌的方法制作大鼠APN(急性肾盂肾炎)模型,观察各组大鼠肾脏组织以及体温、尿量、肾重系数、血常规、尿常规、尿细菌培养、血清白介素-2(IL-2)、血清C反应蛋白(CRP)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白(SIg A)各项指标的变化,从而以实验的方法探讨导赤承气汤对APN的影响及其作用机制,以期为中医临床应用和教学提供实验依据。急性肾盂肾炎(APN)是由各种病原微生物感染直接引起肾小管、肾间质和肾实质的炎症。临床常见畏寒发热、恶心呕吐、尿频、尿急、尿痛,小腹部的胀痛,腰部疼痛,肋脊角压痛及叩痛等。其基本的病理特点在于肾盂肾盏黏膜充血水肿,表面脓性分泌物,肾皮质有炎症病灶,肾小管上皮肿胀、脱落坏死,间有白细胞浸润等,炎症愈后有瘢痕形成等,但肾小球一般较少受损[1]。在古医籍中虽未见明确的关于APN的记载,但根据其临床有身热,腹满,便秘、口干、唇裂,伴见小便涓滴不畅,溺时疼痛,尿色红赤,时烦渴,舌红脉数等症候,将其归属于中医“淋证”、“癃闭”、“虚劳腰痛”等范畴[2]。并中医从“肾与膀胱相表里”这一体现脏腑相关整体观的理论出发,将其病机特点概括为“肾虚膀胱热”[3]。本研究根据APN的中医病机特点,依据“肾与膀胱相表里”的理论及中医药的现代药理研究,选用导赤承气汤对大肠杆菌所致APN大鼠进行实验研究。导赤承气汤出自吴鞠通《温病条辨·中焦篇》第17条:“左脉牢坚,小便赤痛,时烦渴甚,导赤承气汤主之。”本方即能通泻大便,又能通利小便,可两解大肠与小肠之邪热,为“二肠同治”之法。临床用于阳明腑实兼小肠热盛证。而小肠热盛,下注膀胱,小便必涓滴不畅[4]。因此,对于APN可以采用导赤承气汤甘苦化阴利小便与攻下合法而起到清热泻火、利湿通淋的作用[5]。本研究通过观察大鼠肾脏组织以及体温、尿量、肾重系数、血常规、尿常规、尿细菌培养、血清白介素-2(IL-2)、血清C反应蛋白(CRP)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白(SIg A)各项指标的变化,明确导赤承气汤治疗APN的作用机制,为临床治疗APN和中医教学提供实验依据。方法:1选用健康清洁级雄性SD大鼠28只,体重250±20g,适应性喂养3天,试验期间自由饮水,进食普通饲料,按照随机分配原则分为4组:空白组(Normal control group,K=n6)、模型组(Model group,M=n6)、导赤承气汤组(Daochichengqi Decoction group,D=n8)、左氧氟沙星组(Levofloxacin Hydrochloride group,L=n8),其中除空白组外,其余各组均采用不结扎输尿管直接膀胱注射大肠杆菌(0.6ml)的方法制作APN大鼠模型,于实验造模后第5天处死。2实验给药:四组均在造模后连续给药5天,给药剂量按人与大鼠间药物折算比例系数计算得出,D组以4.9g/kg/d导赤承气汤灌胃,L组以0.06g/kg/d左氧氟沙星灌胃,K组和M组分别给予等量生理盐水灌胃,每天灌胃给药一次,给药容积为8ml/kg/d。3指标检测:每日上午九点,用电子体温计测量大鼠的肛温;第4天将老鼠放置于代谢笼中,收集24小时尿量,观察各组间尿量的变化;处死时称体重、肾重,用于计算肾重系数;从腹主动脉取血,检测大鼠血常规、血清白介素-2(IL-2)、血清C反应蛋白(CRP)各项指标的变化;无菌状况下从膀胱抽取尿液,检测尿细菌培养、尿常规、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和分泌型免疫球蛋白(SIg A)各项指标的变化;将纵行切开的左侧大部分肾脏组织置于10%多聚甲醛液中固定,脱水,石蜡包埋,行HE染色,用于光镜下观察肾脏结构和变化。结果:1各组大鼠指标检测结果体温的测定结果,与空白组相比,模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组造模后体温都呈上升趋势,模型组体温升高最明显,但无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比,导赤承气汤组和左氧氟沙星组体温呈下降趋势,且左氧氟沙星组体温下降较明显,但与导赤承气汤组比较无统计学差异(P>0.05)。24小时尿量的测定结果,与空白组相比,模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿量都增加,模型组增加的较为显著,但无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比,导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿量减少,但无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。肾重系数的测定结果,与空白组相比,模型组的左肾重系数明显升高,有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,导赤承气汤组左/右肾重系数降低,有统计学差异(P<0.05),左氧氟沙星组左/右肾重系数降低,有高度统计学差异(P<0.01)。但导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。血常规的测定结果,白细胞及中性粒细胞的测定结果,与空白组相比,模型组白细胞水平明显升高,有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,左氧氟沙星组白细胞及中性粒细胞水平下降,有高度统计学差异(P<0.01),导赤承气汤组白细胞及中性粒细胞水平下降,但无统计学差异(P>0.05)。与导赤承气汤组相比,左氧氟沙星组白细胞水平下降,有统计学差异(P<0.05)。红细胞及血红蛋白的测定结果,与空白组相比,模型组红细胞及血红蛋白水平下降,有统计学差异(P<0.05)。但导赤承气汤组、模型组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。血小板的测定结果,各组间比较无统计学差异(P>0.05)。尿常规的测定结果,尿白细胞:与空白组相比,模型组尿白细胞增多,有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,导赤承气汤组尿白细胞减少,有统计学差异(P<0.05),左氧氟沙星组尿白细胞减少,但无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿潜血:与空白组相比,模型组尿潜血增多,有统计学差异(P<0.01)。但模型组、导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿细菌培养结果,与空白组相比,模型组尿培养阳性率有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,左氧氟沙星组尿培养阳性率有统计学差异(P<0.05),导赤承气汤组尿培养阳性率无统计学差异(P>0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。尿SIg A的测定结果,与空白组相比,模型组尿SIg A水平降低,有统计学差异(P<0.01)。与模型组相比,导赤承气汤组和左氧氟沙星组尿SIg A水平增高,有统计学差异(P<0.01)。与导赤承气汤组相比,左氧氟沙星组尿SIg A水平较高,有统计学差异(P<0.05)。尿NAG酶的测定结果,各组间比较无统计学差异(P>0.05)。血清IL-2的测定结果,与空白组相比,模型组IL-2水平增高,无统计学差异(P>0.05)。与模型组相比,中药组IL-2水平降低,有统计学差异(P<0.05)。导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无统计学差异(P>0.05)。CRP的测定结果,与空白组相比,模型组CRP水平增高,有高度统计学差异(P<0.01)。与模型组相比,导赤承气汤组CRP水平降低,有统计学差异(P<0.05),左氧氟沙星组CRP水平也降低,有高度统计学差异(P<0.01)。但导赤承气汤组和左氧氟沙星组之间无显著差异(P>0.05)。2光镜下肾组织病理形态学观察空白组大鼠肾组织结构完整,未见病理改变;模型组大鼠肾盂粘膜下及间质区可见到大量淋巴细胞灶性浸润,间质区毛细血管扩张、充血,肾小管坏死;导赤承气汤组和左氧氟沙星组肾组织病理变化较模型组明显改善,大鼠肾盂粘膜下及间质区少量淋巴细胞灶性浸润,间质区毛细血管轻度扩张,肾小管轻度坏死,血管轻度充血。结论:1导赤承气汤能升高APN大鼠分泌型免疫球蛋白A(SIg A)水平,降低血中白细胞及中性粒细胞(WBC、N)、血清白介素-2(IL-2)、血清C反应蛋白(CRP)、尿白细胞水平,且减轻肾盂粘膜下及间质区中性粒细胞及淋巴细胞浸润、毛细血管扩张、充血及间质水肿,有一定的肾保护作用,短期治疗效果与左氧氟沙星无明显统计学差异(P>0.05)。证明导赤承气汤对APN具有一定的治疗作用。2导赤承气汤对APN的作用机制可能与其清热利小便通腑而起到抑菌抗炎,增强尿道局部免疫功能的作用有关。3实验研究证实导赤承气汤是通过抑菌抗炎、增强尿道局部免疫功能发挥其甘苦化阴利小便和攻下泻热作用,从而达到清热利湿通淋的目的。为中医教学及临床应用提供了实验依据。4实验研究证实在提高尿SIg A水平及抑菌抗炎方面,左氧氟沙星的疗效要优于导赤承气汤,提示在临证时应根据患者病情实际情况,分别选择适合的中西医治疗方法。但导赤承气汤以其整体治疗优势,以及毒副作用小、较少出现耐药性或其他不良反应等优势,临床可以作为治疗APN的辅助疗法,以提高临床治愈率、减少复发率。