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目的:观察大鼠出生前后(从胚胎期第16天至出生后第21天)黑质致密部(SNc)多巴胺(DA)能神经细胞的发育。
方法:采用SD大鼠为实验动物,分别观察胚胎期第16天(E16)、E18、E20、出生后第1天(P1)、P3、P7、P14、P21共八个时间点SNc神经细胞酪氨酸羟化酶(TH)的表达。
(1)取每个时间点的SD大鼠(n=6)SNc组织匀浆,采用RT-PCR方法检测SNc的TH-mRNA水平。
(2)取每个时间点的SD大鼠(n=6)SNc组织匀浆,采用Wlestem-blot方法检测SNc的TH蛋白水平。所得电泳条带均用ImageJ软件进行处理。
(3)取每个时间点的SD大鼠(n=6)SNc区段,石蜡包埋,行连续冠状切片,采用免疫组织化学的方法,用抗TH抗体标记SNc的DA能神经细胞,分别计数SNc全程的DA能神经细胞面数密度和SNc嘴侧段、中间段、尾侧段三段的DA能神经细胞面数密度(等面积上的TH阳性细胞数)。结果均行统计学分析。
结果:
(1) SNc的TH-mRNA表达结果:SNc的TH-mRNA表达在E16时较低,随着发育,TH-mRNA表达先呈现逐渐上升趋势,至P1时上升到较高水平;后呈现下降趋势,至P3时下降到较低值。此后,TH-mRNA表达又呈现逐渐上升的趋势,至P14时上升到最高水平,P14之后无明显变化。
(2)SNc的TH蛋白表达结果:SNc的TH蛋白表达在E16时较低,随着发育,TH蛋白表达先呈现逐渐上升趋势,至P1时上升到较高水平;后呈现下降趋势,至P3时降低到接近E16的水平。此后TH蛋白表达又呈现逐渐上升趋势,于P14达最高值,P14后无明显变化。这与TH-mRNA表达水平的检测结果一致。
(3)SNc全程的DA能神经细胞面数密度:将SNc作为一个整体,其全程的DA能神经细胞面数密度在E16时较低,随着发育,SNc全程的DA能神经细胞面数密度先呈现逐渐增加趋势,至P1时增加到较高水平;后呈现急剧下降趋势,在P3时下降到最低值。此后DA能神经细胞面数密度又呈现逐渐增加的趋势,于P14增加到最高值,P14之后无明显变化。
(4)SNc嘴侧、中间、尾侧三段的DA能神经细胞面数密度:嘴侧段DA能神经细胞面数密度,在E16时较低,随着发育,嘴侧段DA能神经细胞面数密度逐渐增加,至E20时达到最大值,此后出现逐渐下降趋势,在P7时下降到最低值,P7之后不再有明显改变;中间段,在E16时较低,随着发育,DA能神经细胞面数密度先呈现逐渐增加趋势,至P7时达最大值,后呈现下降趋势,在P14时下降到较低水平,P14之后无明显变化;尾侧段,在E16时较低,随着发育,尾侧段DA能神经细胞面数密度先呈现逐渐增加趋势,在P1时增加到较高水平;后呈现急剧下降趋势,在P3时降到最低值。此后又出现急剧增加的趋势,至P7时达最高值,P7之后无明显变化。
结论:
(1)大鼠出生前后SNc的TH表达先呈现逐渐增加的趋势,后呈现下降趋势,在P3时下降到较低值。此后又逐渐增加,至P14达到最高值,P14之后不再有明显改变。
(2)大鼠出生前后SNc嘴侧段和中间段的DA能神经细胞面数密度均先呈现增加趋势,后呈现逐渐减少趋势,嘴侧段于P7时数量最少,此后不再有明显改变;中间段至P14时数量最少,此后不再有明显改变;尾侧段DA能神经细胞面数密度先呈现增加趋势后呈现急剧减少的趋势,在P3时下降到最低值,此后急剧增加,至P7时达最高值,P7之后不再有明显改变。