【摘 要】
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金属硫蛋白（Metallothionein 简写为MT）是一种低分子量，富含半胱氨酸，并能结合重金属的蛋白质。这种存在于大多数生物体内的蛋白，其结构在进化中相当保守，功能也基本一致。研究表明
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金属硫蛋白（Metallothionein 简写为MT）是一种低分子量，富含半胱氨酸，并能结合重金属的蛋白质。这种存在于大多数生物体内的蛋白，其结构在进化中相当保守，功能也基本一致。研究表明，它与细胞抗重金属中毒作用密切相关。
目前，哺乳动物MT 转入植物的实例较多，尚未见无脊椎动物MT基因转化植物的报道。蚯蚓富含MT等重金属结合蛋白，能够选择性吸收并富集土壤中的镉。本研究首先通过PCR 将赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）MT基因两端加上适当的酶切位点，以构建于植物表达载体pPZP111，得到pPZP-efMT，并经PCR和酶切实验进行确认；随后，用三亲交配法分别将其导入根瘤农杆菌EHA105和LBA4404中，质粒提取、酶切和PCR结果表明，表达载体已经转入农杆菌中；最后，通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草。通过试验得出以下结论：经过预培养比未经预培养的外植体更易于转化；侵染过程确定最适农杆菌侵染浓度为OD600=0.6，时间为7 min；选择培养时子叶与培养基要充分接触，较容易分化。从而建立了一套适合本实验室的农杆菌转化体系。以幼苗的叶片基因组DNA为模板，PCR 扩增，经过三次重复试验，32株再生烟草幼苗，筛选出7株阳性株，初步确认efMT基因已整合到烟草基因组，为进一步验证转基因烟草的抗重金属能力奠定了基础。
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