骨桥蛋白OPN对BRL-3A细胞生长的作用研究

• 作 者: 李晓芳
• 出 处: 河南师范大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 骨桥蛋白 BRL-3A细胞 慢病毒 小干扰RNA

肝脏是唯一具有强大再生能力的器官,然而肝脏作为最大的消化腺,容易受到各种各样的由代谢物、毒性物质、微生物、切除等损伤,因而需要启动肝再生(liver regeneration,LR)恢复受损肝脏在结构和功能上的完整性。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)作为一种分泌性磷酸化糖蛋白,在多种组织、细胞及体液中广泛分布。大量研究表明,肝再生与炎症反应、细胞活化和增殖等活动密切相关,而OPN作为急性期蛋白、炎症反应调节因子,除与肝脏疾病的发生关系密切外,可能也参与肝再生,促进受损肝脏细胞的自我修复。我们前期的体内实验显示OPN具有明显的促肝再生作用,而肝细胞是肝再生中动员的主要细胞,因此,OPN能否有效地作用于肝细胞,进而影响肝再生尚不清楚。因此,本文通过内源性改变大鼠正常肝细胞系BRL-3A细胞中OPN的表达,研究其对BRL-3A细胞功能的影响,以阐明OPN对再生肝中肝细胞增殖的调控机理。首先通过慢病毒介导的转基因技术使细胞稳定过表达OPN,然后用小RNA干扰方法下调BRL-3A细胞中OPN的表达,结果表明细胞中OPN的表达有效增加和降低。然后通过MTT、BrdU掺入法、流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot方法研究OPN对BRL-3A细胞功能和靶基因表达的影响,结果发现,BRL-3A细胞中OPN过表达后,与对照相比,其细胞活性增加,S期和G2/M期细胞比例增加,ERK1/2,AKT1和STAT3等信号通路上关键蛋白MAPK,AKT1,STAT3和NFKB1表达上调,靶蛋白BAX减少,BCl-2和CCND1却增加;BRL-3A细胞OPN的表达被干涉后,细胞活力及增殖率降低,S期和G2/M期细胞比例下降,信号通路关键蛋白MAPK,AKT1,STAT3和NFKB1和表达明显降低,且靶蛋白BAX表达增加,但BCL-2和CCND1表达减少。结论:OPN可能通过JAK/STAT3,ERK1/2,PI3K/AKT和NF-κB途径调控靶基因CCND1,BCL-2和BAX的表达,从而促进肝细胞的增殖。