条斑紫菜抗性相关代谢路径分析及SSR分子标记筛选

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条斑紫菜是一种重要的经济海藻。近年来条斑紫菜种质退化,影响了紫菜产业的发展,培育优良的种质成为亟需解决的问题。鉴于条斑紫菜生活环境的特点,可以从提高其抗性方面进行良种培育。良种培育需要有优良性状的种质资源,但是条斑紫菜育种研究相对陆地作物来说起步较晚,基础研究也比较薄弱,目前还没有明确的与抗性特征相关的位点和分子标记。正因如此,本论文聚焦条斑紫菜的抗性育种,一方面研究其光合作用过程对盐胁迫条件的响应,确定藻体抗性特征的关键位点;另一方面基于条斑紫菜基因组测序信息开发SSR标记,通过人工诱变扩展其遗传多样性,为定位抗性特征相关数量性状位点奠定基础。主要研究结果如下:  (1)分析条斑紫菜光合作用过程对盐胁迫的响应,发现光系统Ⅱ(PSⅡ)对高盐胁迫条件比光系统Ⅰ(PSⅠ)更敏感。在高盐(120‰)条件下,PSⅡ的实际光合量子产量(effective PSⅡ quantumyield,YⅡ)几乎为零,但是PSⅠ的实际光合量子产量(effective PSⅠ quantumyield,YⅠ)维持较高活性,表明在PSⅡ被抑制时PSⅠ运转时的电子来源于基质侧还原力。条斑紫菜随着盐度的升高藻体淀粉含量呈下降的趋势,可溶性糖含量却与其相反;同时,随着盐度的升高磷酸戊糖途径(oxidative pentose phosphate pathway,OPPP)的关键酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,EC1.1.1.49,G6PDH)和6-磷酸葡糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,EC1.1.1.44,6PGDH)的活性呈上升趋势,糖酵解途径中的重要酶3-磷酸甘油醛脱氢酶(cytosolic glyceraldehyde3-phosphatedehydrogenase,EC1.2.1.12,GAPDH)活性却呈下降的趋势。紫菜细胞还原力含量测定结果显示,由OPPP途径产生的NADPH含量呈升高的趋势,而糖酵解途径中产生的NADH含量却呈下降趋势。研究结果说明,在盐胁迫的条件下淀粉降解速度加快,产生的可溶性糖进入OPPP途径,产生的还原力NADPH推动了PSⅡ的环式电子传递运行。  (2)基于条斑紫菜全基因组测序信息,开发了700对完全重复类型的SSR标记。在270 M基因组中存在254495个SSR标记,平均每隔1kb存在1个SSR标记;条斑紫菜的SSR标记包括2-6个碱基的重复,其中两碱基所占的比例最多,其次是三碱基。重复类型中CG/GC比例最高,其次是CGG/CCG类型。在保存的16个条斑紫菜样品中分析了SSR标记的多态性情况,发现98对SSR标记在这些样品中具有多态性。根据PCR产物电泳结果进行遗传分析,发现平均等位基因数(Na)为2.479;有效等位基因数(Ne)为1.558;香农信息指数(Ⅰ)为0.543;观察杂合度(Ho)为0.168,期望杂合度(He)为0.32,PIC为0.35。聚类分析将这16个样品聚成了两大类,说明种质混杂,样品间存在基因交流。  (3)化学(EMS)和物理(重离子束辐照)方法对条斑紫菜丝状体进行了诱变,结果表明:0.2 M EMS处理2h、0.4 M EMS处理1.5h和0.6 M EMS处理1h是比较有效的化学诱变方法;重离子束辐照方法表明100-150戈瑞(GY)是比较有效的剂量。随机选取20个重离子束辐照丝状体样品,用SSR分子标记分析其遗传多样性,结果表明:平均等位基因数为(Na)2.842;有效等位基因数(Ne)为1.935;香农信息指数(Ⅰ)为0.756;观察杂合度(Ho)为0.656,期望杂合度(He)为0.46,PIC平均为0.39。诱变条斑紫菜聚类分析结果表明不同的样品基本按照重离子束辐照时所用的剂量进行聚类,这些样品被分成了几个亚类,最终这些亚类同对照聚到一起。这些诱变的样品较保存的条斑紫菜遗传多样性高。
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