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本实验通过制备AFB1免疫抗原,免疫动物获得了多克隆抗体,将制备出的抗体与合适的微球载体化学偶联,得到AFB1免疫亲和微球。采用HPLC法检测偶联反应对抗体活性的影响。主要的研究内容及结果如下:
(1)采用胺甲基化反应法合成了AFB1与BSA的连接物(AFB1-BSA),作为免疫抗原。通过对不同反应温度AFB1利用率的考察,结果表明了50℃时最大,为39.3﹪,产物中AFB1与BSA的摩尔比最大为10.68∶1。
(2)分别采用从Sigma公司购买的抗原和自制的抗原免疫日本大耳白兔,获得ELISA效价分别为1∶32000和1∶30000的抗血清。采用从Sigma公司购买的抗原免疫Ba1b/c小鼠,效价最高为1∶8000。
(3)采用碳化二亚胺法偶联抗体与硅胶微球,研究了抗体与微球偶联条件的影响。结果表明最适偶联pH值为pH6.0~6.2,最佳EDC用量为30mg/g微球,最适反应时间为17~20h,抗体的最大偶联效率为72.2﹪。
(4)采用高效液相色谱柱前衍生法检测偶联反应对抗体活性的影响。结果表明,抗体连接微球后,可以很好的结合小于等于20ng/mL的AFB1,且各浓度间线性关系良好,相关系数R=0.9978。对偶联微球后的抗体稳定性进行了研究,结果表明180天内抗体对AFB1的结合能力保持稳定。