毛细管区带电泳法在糖分析中的应用研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tjbxgb123
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毛细管电泳技术(CE)具有分析速度快、分离效率高、运行成本低以及分离模式多样化等特点,它作为一种迅速发展的分离技术在生命科学研究中已得到越来越广泛的应用,毛细管电泳技术目前被认为是最强有力的分离分析手段之一。本论文采用毛细管区带电泳法,对糖类药物及中药中糖类成分的分析方法进行了研究。全文内容概括如下:   一、对八种单糖的毛细管区带电泳/间接紫外检测分析方法进行了较深入的研究,以2,6-吡啶二羧酸(PDC)为背景电解质,详细考察了PDC浓度、pH值、温度、电压,以及添加剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的浓度等因素对八种单糖电泳行为的影响,在此基础上确定了优化分离八种单糖的电泳条件:背景电解质溶液为60 mmol·L-1PDC(含0.3mmol·L-1CTAB),pH值12.60,分离电压为-20 kV,温度为25℃。   二、建立了地黄中单糖和寡糖的毛细管区带电泳/间接紫外检测分析方法。电泳条件:采用未涂层熔融石英毛细管(61.0 cm×50μm I.D.),背景电解质溶液为60 mmol·L-1PDC(含0.3 mmol·L-1CTAB),pH值为12.60,检测波长为350 nm,参比波长为275 nm,分离电压为-12 kV,温度为20℃。在此条件下,果糖、葡萄糖、半乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖和水苏糖在35 min内实现理想分离。果糖在0.45~5.62 mg·mL-1浓度范围内、葡萄糖和半乳糖在0.22~2.81mg·mL-1浓度范围内、蜜二糖和蔗糖在0.43~5.35mg·mL-1浓度范围内、棉子糖在0.63~7.85mg·mL-1浓度范围内、水苏糖在1.26~15.79mg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为95.0%~104.2%,RSD<4.8%。应用上述方法,测定了不同产地的鲜、生和熟地黄中单糖和寡糖的含量,为地黄药材的质量评价提供了新的定量依据。   三、建立了地黄和六味地黄丸中蜜二糖、葡萄糖和半乳糖的柱前衍生化毛细管区带电泳分析方法。电泳条件:运行缓冲液为110 mmol·L-1硼酸,分离电压为12kV,检测波长为245nm,温度为30℃。蜜二糖在30.7~614.4μg·mL-1、葡萄糖在18.0~360.0μg·mL-1,半乳糖在18.0~360.0μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.7%~100.8%,RSD<3.3%。应用上述方法,分别测定了鲜、生、熟地黄和六味地黄丸中蜜二糖、葡萄糖和半乳糖的含量,为全面控制六味地黄丸的内在质量提供了新的定量依据。   四、对地黄在加工炮制过程中的糖含量变化规律进行了研究,采用毛细管区带电泳/间接紫外检测分析方法测定了烘焙前后以及炮制不同时间的地黄样品中的单糖和寡糖含量。依据地黄加工炮制过程中的糖含量变化,确证了在烘焙过程中地黄中的水苏糖和棉子糖发生脱半乳糖反应(生成棉子糖和蔗糖)、炮制过程中发生脱果糖反应(生成甘露三糖和蜜二糖)的过程。同时采用液相色谱-串联质谱法对地黄炮制过程中产生的寡糖(甘露三糖)进行了鉴定。   五、建立了盐酸氨基葡萄糖制剂的毛细管区带电泳/间接紫外检测分析方法。电泳条件:背景电解质溶液为60 mmol·L-1pDC(含0.3 mmol·L-1CTAB),pH值为12.30,分离电压为-20kV,检测波长为350 nm,参比波长为275 nm,温度为20℃。盐酸氨基葡萄糖在0.5~5.0 mg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为95.0%~104.2%,RSD<2.1%。应用上述方法测定了盐酸氨基葡萄糖制剂含量。
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