论文部分内容阅读
早期的研究表明许多种类的化学物质能够直接作用于下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴。为了有效地评估这些化学物质对HPT轴的影响，除了使用已有的方法之外，还需要寻求更为灵敏、准确的评价方法和模式。促甲状腺激素亚基β(TSHβ)在HPT轴中起着核心的调控作用，其表达水平反映着体内HPT中各关键节点的功能状态。为了能实时便捷地检测模式鱼类斑马鱼体内tshβ表达水平的变化，我们首先克隆了斑马鱼tshβ基因5’序列，通过对不同片段的突变体形式对荧光蛋白在体内表达调控能力的观察，分析了tshβ的启动子。我们鉴定了决定斑马鱼垂体前叶tshβ表达水平的最小必需调控区域。采用斑马鱼tshβ基因5’序列作为调控EGFP的调控区域构建转基因载体，获得了3个稳定的tshβ:EGFP转基因报告鱼品系。当采用致甲状腺肿化学物质和外源性甲状腺激素(THs)处理tshβ:EGFP转基因报告斑马鱼时，我们观察到在垂体前叶中的EGFP表达和斑马鱼垂体内源性的tshβmRNA有着相似的应答表型。这些结果表明由tshβ启动子调控的垂体中的报告性EGFP的表达，可以真实地反映体内tshβ的表达水平，该特性证明tshβ:EGFP转基因报告鱼能够作为快速评价具有对HPT轴化合物干扰效应的化合物的一种活体模型，从而在环境内分泌干扰物的评估和筛选方面具有较强的应用前景。