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大肠杆菌(E.Coli)O157：H7感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病。自1982年美国首次发现该病以来,先后在日本等40多个国家有不同程度的暴发流行,死率较高。大肠杆菌0157：H7的感染已成为世界性的问题。世界卫生组织已将其列入新的食源性疾病的病原菌。目前,检测大肠杆菌0157：H7的方法很多,但是大多方法存在时间较长,需要一些特殊的仪器设备,或准确率不够高的缺点。因此寻找一种便捷灵敏的检测大肠杆菌0157：H7的方法对相关疾病的预防和治疗十分重要。本研究首先利用免疫磁珠富集大肠杆菌O157：H7菌体,即选择1μm和200nm两种不同尺度的磁珠,研究磁珠的大小和浓度对富集效率的影响,筛选并确定出最佳的反应条件为：1.2μL的200nm的磁珠富集1mL的10-6的大肠杆菌O157：H7(OD600=1.0～1.2)的稀释液时,富集效率最佳。并且有效地浓缩了检测样品中大肠杆菌0157：H7的浓度。将富集好的菌体用自研的磁珠法提取大肠杆菌0157：H7的基因组DNA,依据高盐离子浓度下多聚核苷酸与羧基修饰的磁珠表面会发生非特异吸附,而蛋白、单糖、多糖和脂类等细胞成分不被吸附的原理,建立一种以磁性微珠为载体的简单快速的细菌基因组DNA纯化方法,可在7min内完成整个提取过程,简便易于操作。之后用环介导的等温扩增(LAMP)反应检测大肠杆菌O157：H7的DNA,优化反应条件,最终使检测灵敏度高达30CFU／mL。LAMP反应是对靶基因的6或8个特异部位设定4或6种引物,利用具有链置换活性的BstDNA聚合酶在恒温条件下催化新链合成,从而使靶基因高效扩增。LAMP较PCR方法时间更短,操作更简便,特异性强,灵敏度提高了一个数量级。本研究将免疫磁珠技术、磁珠提取DNA技术和LAMP反应检测大肠杆菌O157：H7有机结合,整个流程操作简便易行,不需要任何的大型的仪器,可在70min内完成。本法是一种高灵敏快速检测大肠杆菌O157：H7的简便方法,并为其检测自动化奠定了一定的基础,也可为快速灵敏地检测其他病原菌提供借鉴。