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目的观察卵巢切除对大鼠全层皮肤缺损创面愈合情况的影响,以及雌激素受体在大鼠全层皮肤缺损创面愈合过程中的表达情况;进而观察雌激素受体在表皮干细胞表面的表达情况,研究雌激素对离体培养的表皮干细胞增殖迁移活性的影响,探讨雌激素及其受体在创面愈合过程中的作用及相关分子机制。方法1.动物实验2月龄雌性wistar大鼠40只,随机分组,分为假手术组(10只),去卵巢组(15只)和单纯手术组(15只)。8周后,在背部制成全层全损皮肤创伤愈合模型,分别于伤后1、3、7、14和21d取材。常规组织学观察皮肤愈合过程,及记录三组各个时间点的创面面积和伤腔容积,并计算创面愈合率,以及免疫荧光观察雌激素受体的表达情况。2.细胞实验采用密度梯度离心法培养正常成人皮肤的表皮干细胞(hESCs),流式细胞仪检测培养第二代细胞整合素?1,CK10,CK14,CK19抗原表达以鉴定ESCs。实验分3组:(1):表皮干细胞专用培养基(即Epilif培养基)中加入乙烯雌酚(Diethylstilbestrol)配成浓度为0.1nmol/l(雌激素组);(2):表皮干细胞专用培养基中加入雌激素受体拮抗剂雷洛西芬(Raloxifene hydrochloride)配成浓度为10nmol/(l雌激素受体阻断剂组);(3):单纯ESCs培养组(空白组)。应用流式细胞仪检测3组的ER-?的抗原表达情况。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的ESCs以制备宽度为100um的“离体的单层表皮细胞损伤”模型。模型制备后24、48、72h,倒置显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的ESCs细胞数,并用sigmaScan pro5软件计算创面愈合率,用MTT法检测表皮干细胞的增殖分化活性,判断雌激素对ESCs分裂增殖活性的影响。结果1.动物实验比较各个时间点的伤腔容积和创面愈合率,单纯手术组和假手术组的伤腔容积明显小于去卵巢组;单纯手术组和假手术组的创面愈合率明显大于去卵巢组(P<0.01),而单纯手术组和假手术组之间无明显差异。损伤早期(1-3天)ER-β表达逐渐加强,主要在真皮层,单纯手术组和假手术组ER-β表达与去卵巢组相比无明显差别;7天ER-β表达逐渐加强,主要表达在真皮层,表皮层可见部分表达;14天ER-β表达仍在较高的水平,尤其表皮层表达明显,且7-14天单纯手术组和假手术组ER-β表达与去卵巢组相比有明显差别;21天ER-β有所减弱,但在表皮层及真皮血管中仍有较强表达。2.细胞实验流式细胞仪检测第二代ESCs整合素?1,ck19,ck14和ck10抗原阳性率(分别是96.63%,95.47%,94.27%,1.32%)。雌激素组、雌激素受体阻断剂组和空白组的ER-?抗原阳性表达率(66.43%,43.47%,54.27%)。雌激素组、雌激素受体阻断剂组和空白组越过创缘进入创面的细胞在伤后24小时分别(33.6±0.34),(8.5±0.75)和(11.4±0.45)个/高倍视野;48h分别有(67.5±0.24),(27.5±0.35)和(38.5±0.45)个/高倍视野;72h分别有(117.5±0.35),(63.5±0.35)和(78.5±0.45)个/高倍视野。3组伤后72小时创面愈合率分别为(69.00±0.05)%, (35.00±0.05)%,(48.00±0.06)%。上述指标雌激素组与空白组和雌激素受体阻断剂组具有显著差异(P<0.01),空白组与雌激素受体阻断剂组比较,差异性显著(P<0.01)。结论大鼠去卵巢后创面愈合速度明显减慢,雌激素系统参与创面愈合的各个阶段,影响大鼠的创面愈合率;雌激素具有促进表皮干细胞分裂增殖和迁移的能力,在皮肤损伤的修复活动中充当重要角色;有助于未来临床上加快创面愈合的速度,提高组织修复的质量,甚至在某些难愈性创面的治疗提供一种新的手段。