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目的：乳腺癌是一种全身性恶性疾病，尽管治疗方案不断更新，但其远期生存率近20年来却无明显提高。影响其预后的主要因素是全身转移。临床发现，仍有近30%腋淋巴结阴性的患者于术后5年内很快出现复发、转移及死亡，而目前的常规检查远不能起到监测全身转移、观察疗效、指导治疗的作用。微转移作为临床转移之前的隐匿阶段，在乳腺癌整体治疗过程中是一个很关键的时期。检测和控制乳腺癌患者微转移，是解决上述诸问题的关键。骨髓作为乳腺癌最易发生远处转移的部位，较腋淋巴结及外周血更能反映肿瘤细胞全身播散状况。尽管目前针对乳腺癌浸润转移的研究已经很多，但检测乳腺癌骨髓微转移，探讨其与乳腺癌各临床因子及生物学因子关系的研究尚不多见。细胞角蛋白19（Cytokeratin 19，以下CK19）是一种在上皮源性细胞（如乳腺癌细胞）中表达的基因产物，具有很强的组织特异性。本研究采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcriptase polymerase chain reaction，以下RT-PCR)以CK19为肿瘤标记物，检测102例Ⅰ～Ⅳ期乳腺癌患者骨髓微转移，同时采用免疫组织化学法检测肿瘤组织ER、PR、Cath-D、C-erbB-2及VEGF诸生物学因子的表达，并将骨髓微转移结果与上述生物学因子及常用临床病理学因子进行统计学分析，以探讨骨髓微转移与上述因子的关系，了解各因子在乳腺癌微转移发生、发展中之作用，进一步明确乳腺癌转移复发规律，为<WP=4>临床制定合理的治疗方案，寻求最佳治疗效果及评价预后提供理论依据。方法：本研究标本随机取自2002年10月至2003年10月我院所收治经病理证实的102例乳腺癌患者，另取10例乳腺增生、纤维腺瘤等良性乳腺疾病，以作对照检查。所有乳腺癌患者均为女性，年龄30～76岁，平均49.2岁。绝经前54例，绝经后48例。病理类型：浸润性导管癌53例，浸润性小叶癌35例，髓样癌4例，粘液癌2例，不典型增生癌变、管状腺癌及派杰氏病等共8例。临床分期（UICC恶性肿瘤TNM分类第4版，1987）：Ⅰ期12例，Ⅱ期 59 例，Ⅲ期 29 例，Ⅳ期2例。组织学分级：Ⅰ级 24 例，Ⅱ级 46 例，Ⅲ级 32 例。研究对象术前在局麻下于髂前上嵴行骨髓穿刺，取骨髓液10毫升，采用淋巴细胞分离液分离，收集淋巴细胞层，提取总RNA，以CK19为肿瘤标记物，采用RT-PCR法（一步法）扩增产物并鉴定。采集同组病人癌组织标本，用免疫组化s-p法检测ER、PR、Cath-D、C-erbB-2及VEGF诸生物学因子的表达。统计学方法：采用χ2检验分析CK19表达与传统临床病理学因子及生物学因子的关系。判定标准：P <0.05有统计学意义。 结果：1. CK19在骨髓中的表达情况：10例良性乳腺疾病骨髓CK19表达均为阴性，102例乳腺癌患者骨髓CK19表达阳性者为58例，占56.9%。2. 骨髓CK19表达与肿块大小、淋巴结转移及临床分期的关系：102例乳腺癌患者骨髓CK19基因表达率随乳腺癌肿块增大而增高，肿块≤2 cm组（25.0%）CK19表达率明显低于2～5 cm组（55.9%）及＞5 cm组（77.8%），差异有显著性意义（P <0.005），但2～<WP=5>5 cm组及＞5 cm组差异无统计学意义。骨髓CK19基因表达率随乳腺癌临床分期增加而增高，Ⅰ期CK19表达率为33.3%，Ⅱ期52.5%，Ⅲ～Ⅳ期74.2%，Ⅰ期CK19表达率与Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期比较，差异有显著性意义（P <0.05）。尽管腋淋巴结转移阴性组骨髓CK19表达率（49.0%）低于阳性组（64.7%），但差异无显著性意义（P＞0.1）。3. 骨髓CK19表达、雌孕激素受体及组织学分级间的关系：本组乳腺癌患者骨髓CK19基因表达率随乳腺癌组织学分级增加而增高，Ⅰ级CK19表达率(25.0%)明显低于Ⅱ级（63.0%）及Ⅲ级（71.9%），差异有显著性意义（P <0.005）。CK19基因表达率随乳腺癌组织ER及PR蛋白表达增强而降低，其中ER（―）组(77.8%)及ER（+）组(63.6%)CK19表达率明显高于 ER（++～+++）组(43.4%)，差异有显著性意义（P <0.025）；PR（―）组(67.7%)及PR（+）组(73.1%) CK19表达率明显高于 PR（++～+++）组(40.0%)，差异有显著性意义（P <0.01）。另外, 乳腺癌组织ER及PR蛋白表达随乳腺癌患者组织学分级增加而降低，差异均有显著性意义（ER: P <0.05；PR： P <0.05）。 4. 骨髓CK19表达与乳腺癌Cath-D、VEGF及 C-erbB-2表达的关系： 102例乳腺癌患者骨髓CK19基因表达率随乳腺癌组织Cath-D蛋白表达增强而呈增高趋势，Cath-D（－）组CK19表达率为16.7%，Cath-D（+）组为 38.5%，Cath-D（++）组为62.5%，Cath-D（+++）组为81.3%，差异有极显著性意义（P <0.005）。随乳腺癌组织VEGF蛋白表达的增强，CK19基因表达率亦呈增高趋势，VEGF（－）组CK19表达率为31.6%，VEGF（+）组为54.2%，VEGF（++～+++）组为66.1%，差异有显著性意义（P <0.05）。但C-erbB-2<WP=6>各组CK19表达率差异无显著性意义（P＞0.90）。5. 骨髓CK19表达与乳腺癌患者年龄、月经状况及病理类型的关系：不同年龄、月经状况及病理类型组的乳腺癌患者骨髓CK19基因表达差异无显著性意义（均P＞0.05）。结论：1. 乳腺癌骨髓微转移与肿块大小及临床分期有密切关系，肿瘤的侵袭转移特性随着瘤体积增大而增强，临床分期越晚，远处转移率越高。但肿块小、分期早的乳腺癌患者亦存在部分全身转移