论文部分内容阅读
尖角突脐孢菌（Exserohilum monoceras）是稗草的一种生防潜力菌，本文以具有较高产毒能力的X27菌株为研究对象，对该致病菌毒素的提取工艺、分离纯化方法进行了研究，并分离出了尖角突脐孢菌毒素的化合物单体、确定了毒素的结构性质和化学分子类别，研究结果表明：
用PDA培养基通过固体发酵生产菌种，用PD培养基利用液体摇床发酵在28℃，黑暗条件下，于150 r/min振荡器上震荡培养7d获得大量尖角突脐孢菌作为毒素的原料：发酵滤液和烘干菌丝。
发酵滤液中的毒素用萃取的方法进行提取，发酵滤液在70±1℃真空减压浓缩至原体积的1/10，然后用等体积的乙酸乙酯分三次萃取。分层、合并有机相、无水硫酸钠干燥、减压蒸去溶剂获得粗毒素；发酵菌丝在40℃烘干，然后用10倍量的乙酸乙酯水浴加热55℃条件下分三次进行浸提、无水硫酸钠干燥、减压蒸去溶剂获得粗毒素。生物活性测定结果表明：发酵滤液萃取毒素和菌丝浸提毒素均有较高的活性。萃取和浸提蒸出的溶剂均可多次重复使用，而且设备要求低，可操作性强和极高的生产利用价值。
利用硅胶柱层析和薄层层析(TLC)相结合的方法对粗毒素进行分离并得到四种对稗草均具有抑制活性的单体。在(4－Ⅱ)分离出邻苯二甲酸二丁酯(DBP)，邻苯二甲酸二丁酯在紫外灯照射下有荧光，用乙酸乙酯：石油醚=1：1作展开剂能获得很好的展开，Rf值为0.5，1HNMR中，从化学位移上可以看到苯环的特征吸收峰；在第五次（5－Ⅱ，5－Ⅲ）分离出十六碳酸（棕榈酸）和十八碳酸（硬脂酸），在1HNMR中，这两种物质的羧基的H响应极弱，基本观察不到吸收峰，在第六次(6－Ⅳ)分离出油酸酰胺，这三种物质在紫外灯照射下没有荧光，用邻钼酸然后烘烤能够显色，这四种物质洗脱极性范围都集中在乙酸乙酯：石油醚20:1～1:1之间。
分别测定了不同浓度下邻苯二甲酸二丁酯、十六碳酸（棕榈酸）、十八碳酸（硬脂酸）和油酸酰胺对稗草的活性，其中十六碳酸对稗草根抑制率可达41.56％，对芽抑制率27.93％、十八碳酸对稗草根抑制率为34.90％，对芽抑制率29.18％、油酸酰胺对稗草根抑制率为23.45％，对芽抑制率27.36％、邻苯二甲酸二丁酯对稗草根抑制率为84.49％，对芽抑制率76.18％。这四种物质中邻苯二甲酸二丁酯对稗草的活性相对最强。并且测定了邻苯二甲酸二丁酯对稗草超氧化物岐化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)和丙二醛(MDA)三项生理指标的影响，发现随着邻苯二甲酸二丁酯使用浓度的提高，稗草的SOD、POD和MDA均有不同程度的升高。