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杜鹃红山茶是是我国的特有的珍稀濒危植物,仅分布于阳春鹅凰嶂自然保护区内。它是一种珍贵的种质资源,具有很高的观赏价值、研究价值和经济利用价值,而关于杜鹃红山茶的研究极少,组织培养方面的研究尚未见报道。
本实验以杜鹃红山茶实生苗离体培养增殖的芽条为出发材料,研究适合其增殖和芽条生根的培养基成分;对生根阶段的茎段进行解剖观察研究生根的过程;通过对比嫁接苗与组培苗茎叶的解剖结构,探讨组培苗组织结构存在的缺陷。实验研究得到如下结果。
在芽条增殖培养中,细胞分裂素的作用大小为BA>ZT>KT,不同浓度的BA诱导茎段腋芽萌发率有极显著差异(P0.01)。萌发率以1mg/L BA最高,而成苗率以0.2 mg/LBA为佳。茎段侧芽萌发以单芽萌发为主,但是双芽,丛芽—芽苞也占有一定比例,并在后续培养中起着有利的作用。添加生长素的培养发现,在NAA作用下,芽苗叶片呈黄绿色,浓度高时出现愈伤,叶片细长。添加10%的椰子汁对带顶芽茎段腋芽萌发有很好的促进作用,萌发率达87%。适合杜鹃红山茶茎段侧芽萌发的培养基为MS+BA(0.8—1) mg/L+IBA0.01 mg/L+GA310 mg/L,萌发率达50%—70%;而适合芽条增殖生长的培养基为MS+BA(0.2-0.4)mg/L+IBA(0.01-0.1)mg/L+GA310 mg/L,其成苗率达到58%。
在诱导芽条生根方面,N6、1/2 N6、WPM、1/2WPM等4种培养基的培养效果都很不理想,生根率几乎为0;降低了大量元素浓度的MS基本培养基则能够有效诱导生根。通常在培养基中添加NAA0.5—5 mg/L的诱导生根的方法效果也很差,芽条在这些培养基上仅在基部形成愈伤,顶芽不见明显伸长,生根率低。适合杜鹃红山茶组培苗生根的培养基为(1/2—1/8)MS+IBA(6—8) mg/L+蔗糖2%,生根率达60%—80%,如果先将增殖芽接入1/2MS+IBA4 mg/L+活性炭0.1%培养基上培养一个月,可以得到一批生长一致的苗,此时再转入生根培养基诱导,生根率可提高至90%,不定根浅绿色,密集白色根毛。
对嫁接苗和组培苗的茎叶进行解剖观察比较的实验中发现,组培苗的茎缺乏厚壁组织,叶片较薄,角质层不发达,栅栏组织排列不紧密,间隙较大,说明组培苗在高湿环境中,表皮、栅栏组织和海绵组织发育不完善。对诱导生根的茎段进行取样解剖,观察到根原基在培养后10-20d左右形成,起源于形成层,随后逐渐伸长,突破表皮,成为不定根。
将以上取得的生根小苗进行10-15d炼苗后,移栽至泥炭土与珍珠岩(3:1)的基质上,避免阳光直射,保持较高的湿度,成活率可达90%以上。