论文部分内容阅读
目的通过观察高浓度葡萄糖对人足细胞Galectin-1及足细胞表面标志物podocin表达的影响,初步探讨Galectin-1与足细胞损伤的关系；转染Galectin-1siRNA抑制人足细胞Galectin-1的表达,检测podocin的表达,观察Galectin-1siRNA能否抑制高糖诱导的足细胞损伤。方法以人足细胞株为研究对象,随机分为5组：正常对照组、25mmM高糖刺激12小时组、25mmM高糖刺激24小时组、25mM高糖刺激48小时组、25mmM甘露醇刺激48小时组。采用实时定量PCR(Real-time PCR)、蛋白印迹(Westem-blot)及免疫荧光的方法测定Galectin-1、podocin的表达。用TransIT-TKO-Transfection Reagent转染Galectin-1siRNA至人足细胞,把足细胞分为3组：正常对照组(未转染Galectin-1siRNA),高糖组(未转染Galectin-1siRNA+25mM高糖刺激)和转染组(转染Galectin-1siRNA+25mM高糖刺激)。采用实时定量PCR(Real-time PCR)和蛋白印迹(Westem-blot)方法测定Galectin-1和podocin水平的表达。结果(1)正常培养条件下,人足细胞表达podocin,仅表达少量Galectin-1。(2)25mM高糖刺激人足细胞不同时间后,Galectin-1mRNA表达逐渐上调,呈时间依赖性,12h、24h和48h Galectin-1mRNA表达量分别为对照组的1.3倍、2.2倍(P<0.05)和2.5倍(P<0.05)：Galectin-1蛋白表达量逐渐上调,呈时间依赖性,12h、24h和48hGalectin-1蛋白表达量分别为对照组的1.25倍、1.87倍和2.19倍,均有统计学意义(P<0.05)；甘露醇组与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)25mmM高糖刺激人足细胞不同时间后,podocin mRNA表达逐渐下调,呈时间依赖性,12h、24h和48h podocin mRNA表达量分别为对照组的60%、44%和33%,均有统计学意义(P<0.05)；podocin蛋白表达量逐渐下调,呈时间依赖性,12h、24h、48h podocin蛋白表达量分别为对照组的71%、32%和24%,均有统计学意义(P<0.05)；甘露醇组与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)免疫荧光结果显示,Galectin-1荧光主要表达于足细胞胞浆,胞核中也有部分表达,podocin的荧光则主要表达与细胞膜上；与对照组相比,25mM高糖分别刺激人足细胞24h、48h后,Galectin-1荧光表达逐渐增强,podocin的荧光表达则逐渐降低。(5) Galectin-1siRNA转染入人足细胞后,与高糖刺激组相比较, Galectin-1mRNA及蛋白的表达均被抑制(P<0.05),同时podocin mRNA及蛋白表达上调,与高糖组相比差异均有统计学差异(P<0.05)。结论(1) Galectin-1在体外培养的人足细胞株上有表达,高糖能上调Galectin-1的表达,且呈时间依赖性。(2)高糖能诱导体外培养的人足细胞表面标志物podocin表达下调。(3) Galectin-1可能与高糖诱导人足细胞损伤相关。(4) Galectin-1siRNA可以减轻高糖诱导的人足细胞损伤。