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猪是人类开展异种器官移植、定向育种、转基因生物反应器、疾病模型等方面研究的理想实验动物。针对目前猪卵母细胞体外成熟和胚胎体外生产效率低下这一突出问题，本研究优化猪卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，IVM)培养体系及体外受精技术方法，以其获得稳定的早期囊胚率。同时，针对猪的体细胞核移植(somatic cellnuclear transfer，SCNT)成功率较低、严重制约了SCNT技术应用的问题，本研究也探讨了miRNAs对猪克隆胚胎体外发育的影响。在TaqMan低密度芯片基础上检测猪SCNT囊胚mir-140的表达情况，以及对SCNT胚胎发育的影响，以期为猪克隆胚胎重编程机制的阐明及体细胞核移植效率的提高提供实验支持。实验结果如下： 1.探讨了不同激素组合和添加方法对猪卵母细胞体外成熟的影响。本试验分为两组，成熟体系Ⅰ是将猪的卵母细胞培养在含有PMSG、hCG的成熟液中44-46h；成熟体系Ⅱ是将猪的卵母细胞体外成熟分为两个阶段，前22-23h在含有FSH、LH的成熟液中培养，后22-23h转移至含有PMSG、hCG的成熟液中培养。通过试验的对比，二者之间在成熟率、卵裂率、囊胚率方面差异不显著(P>0.05)；在囊胚细胞数上，后者明显优于前者(P<0.05)，因此，激素的联合培养更适合猪卵母细胞的体外成熟。 2.比较了以上游法与Percoll密度梯度离心法处理猪精子，使其体外获能，观察了体外受精效果。两组受精卵卵裂率无明显差异(P>0.05)，桑葚胚率差异也不显著(P>0.05)，分别为14.91％和17.75%，而囊胚率差异显著(P<0.05)，分别为3.35%和6.98%。表明percoll密度梯度离心法更适于猪的体外受精。 3.用qRT-PCR的方法检测了mir-140在不同发育阶段的猪SCNT胚胎和IVF胚胎中的表达情况，发现猪SCNT囊胚中mir-140的表达量异常高，这与TaqMan低密度芯片的结果一致；同时发现，在其他阶段的SCNT胚胎中mir-140的表达量均高于相应的IVF胚胎，表明SCNT囊胚中差异高表达的mir-140可能来源于供核体细胞。我们通过注射miRNA minics与miRNA inhibitor使mir-140在猪SCNT胚胎中高表达和低表达，检测其对SCNT胚胎发育的影响。结果表明，注射miRNA minics使mir-140高表达后，抑制了SCNT胚胎的发育，而注射miRNA inlubitor组的囊胚率与注射minics组之间存在显著的差异(P<0.05)，分别为13.64%和2.22%。表明通过调控mir-140的表达水平可以提高猪克隆胚胎的体外发育能力。