【摘 要】
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[目的]结合能肯定SLO介导4-氨基联苯氧化反应的体外酶系统实验与4-氨基联苯对HBE 5—LOX蛋白表达、细胞毒性和DNA损伤影响的细胞实验研究,初步探讨细胞内5—LOX对外源化学物
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[目的]结合能肯定SLO介导4-氨基联苯氧化反应的体外酶系统实验与4-氨基联苯对HBE 5—LOX蛋白表达、细胞毒性和DNA损伤影响的细胞实验研究,初步探讨细胞内5—LOX对外源化学物的代谢情况,试图为LOX作为细胞色素P450氧化代谢外源化合物的替代途径提供进一步的依据。[方法]体外酶系统实验:在适宜条件下,大豆脂氧合酶(SLO)与4-氨基联苯(4-ABP)等在酶体系中开始反应后,用分光光度法在特定波长检测反应体系中反应终产物生成情况,并计算SLO对4-氨基联苯氧化代谢速率和NDGA对代谢的抑制率。细胞实验:通过MTT试验检测不同浓度的4-氨基联苯对HBE存活率的影响,分别以不同浓度的4-氨基联苯染毒HBE 24小时,用western-blot印记法检测各组5—LOX蛋白表达的情况;同时用单细胞凝胶电泳实验检测各组的DNA损伤情况。最后检测特异性5—LOX抑制剂(AA861)对5—LOX蛋白表达和多种特异性酶抑制剂对DNA损伤的影响。[结果]在过氧化氢参与下,SLO可以协同氧化4-氨基联苯,氧化后生成偶氮联二苯。LOX经典抑制剂NDGA可抑制该协同氧化作用,且在一定范围内呈剂量效应关系。4-氨基联苯可以使HBE内5—LOX蛋白表达增加,AA-861对5—LOX蛋白表达基本没有影响;4-氨基联苯可以对HBE产生明显细胞毒作用和DNA损伤,AA-861和萘普生可以明显抑制4-氨基联苯毒性和DNA损伤情况。[结论]在过氧化氢参与下,SLO可以介导4-氨基联苯协同氧化,NDGA可以抑制该协同氧化作用。5—LOX在HBE内的蛋白表达是可以经4-氨基联苯调节的,特异性5—LOX抑制剂AA-861对其蛋白表达无明显影响。HBE主要通过5—LOX介导4—氨基联苯协同氧化,产生亲电子自由基与DNA结合,使HBE产生DNA损伤,AA-861可以明显抑制该反应。
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