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目的:探讨糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)-布地奈德对鼻息肉上皮细胞增殖及上皮细胞中糖皮质激素受体-α(Glucocorticoid Receptor-α, GR-α)表达的影响。
方法:(1)将手术中取下的新鲜鼻息肉标本一分为二,一份放于10%福尔马林液中固定,包埋,石蜡切片,通过免疫组化方法,检测鼻息肉上皮细胞中GR-α的表达与分布。另一份采用0.1%胶原酶Ⅳ消化法进行上皮细胞原代培养及纯化,应用相差倒置显微镜对鼻息肉上皮细胞进行形态学初步鉴定;并用鼠抗人细胞角蛋白-19细胞免疫组化染色法对鼻息肉上皮细胞进行鉴定。(2)在含有不同浓度的布地奈德培养液中培养鼻息肉上皮细胞,每天显微镜下观察,通过细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度的布地奈德对鼻息肉上皮细胞增殖的影响,并通过反转录聚合酶链反应方法,将电泳凝胶上的条带置于凝胶图像分析系统分析,检测鼻息肉上皮细胞中GR-αmRNA定量表达。
结果:(1)免疫组织化学染色显示GR-α在鼻息肉组织中均有表达,主要表达于鼻息肉黏膜上皮,腺体内皮细胞及炎症细胞中,以细胞浆为主。GR-α免疫反应阳性产物为胞浆内褐色沉淀物,平均光密度值是(0.361±0.009)。(2)布地奈德浓度为0~5×10-8 mol/L的无血清培养液中,鼻息肉上皮细胞形态无明显改变,布地奈德浓度为1×10-7 mol/L~1×10-6 mol/L的无血清培养液中,鼻息肉上皮细胞随时间延长和浓度增加而逐渐皱缩变形。鼻息肉上皮细胞在浓度为对照组=0mol/L, A=1×10-8 mol/L, B=5×10-8 mol/L,C=1×10-7 mol/L,D=5×10-7 mol/L和E=1×10-6 mol/L的布地奈德培养液中分别培养48 h后的平均存活率分别为100%,(96.573±3.920)%,(96.559±3.101)%,(89.215±1.198)%,(52.833±0.125)%和(29.284±0.311)%。与对照组相比,A组和B组鼻息肉上皮细胞存活率均无明显变化,差别均无明显统计学意义(P﹥0.05);A组鼻息肉上皮细胞存活率与B组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05);鼻息肉上皮细胞平均存活率对照组﹥C组﹥D组﹥E组(P<0.05)。(3)0h组、6 h组、12 h组、24 h组和48 h组GR-αmRNA表达水平分别为(1.196±0.090)、(0.778±0.053)、(0.559±0.024)、(0.530±0.025)和(0.510±0.009)。GR-αmRNA表达水平0h组﹥6 h组﹥12 h组(P<0.05);与0h组相比,24 h组和48 h组GR-αmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);48 h组GR-αmRNA表达水平与24 h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05),24 h组GR-αmRNA表达水平与12 h组相比,差别无明显统计学意义(P﹥0.05)。
结论:(1)GR-α在鼻息肉组织中均有表达,主要表达于鼻息肉黏膜上皮,腺体内皮细胞及炎症细胞中,以细胞浆为主。(2)1×10-7 mol/L~1×10-6 mol/L的布地奈德可抑制鼻息肉上皮细胞增殖,降低上皮细胞存活率。0~5×10-8 mol/L的布地奈德对鼻息肉上皮细胞的增殖影响较小。(3)浓度为1×10-8 mol/L的布地奈德在6h和12h均可显著下调鼻息肉黏膜上皮细胞中GR-αmRNA的表达,而且随着时间不断延长,GR-αmRNA的表达量逐渐下降,在12h达到最低值。