澳大利亚厚皮海绵(Craniella austrialiensis)共附生链霉菌DA11几丁质酶的研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leidyteam
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究采用统计学方法对我国南海澳大利亚厚皮海绵共附生链霉菌DA11产几丁质酶的发酵培养进行了优化,并对其产生的几丁质酶进行了分离纯化及相关酶学性质的分析。 ㈠在已有文献中培养基的基础上,首先通过单因素法,找到了适合DA11生长、产酶的碳氮源,分别是半乳糖和蛋白胨;第二步通过Plackett–Burman实验确定了对产酶影响最重要的三个因素是半乳糖,胶体几丁质和硫酸镁,第三步采用响应曲面法中的Box-Bohnken方法确定了最优发酵培养基的组成为5.00 g/L 半乳糖,2.62 g/L 胶体几丁质,0.10 g/L MgSO4·7H2O,12.5g/L蛋白胨,1.5g/L PO43-(KH2PO4 0.45g/L,K2HPO4 1.05g/L),12.5g/L 粉末几丁质,0.03 g/L FeSO4和0.03g/L ZnSO4·7H2O。通过优化,使放线菌DA11的最大产酶活力达到1559.2 U/g 细胞干重(36.43U/mL),最大细胞干重是 23.3 g/L,分别是原培养基的39.2倍和2.6倍。 ㈡利用最优产酶培养基对菌种进行发酵,然后进行分离纯化。采用硫酸铵饱和沉淀、胶体几丁质亲和以及DEAE-cellulose离子交换柱层析进行纯化。通过纯化,得到了比活力为2.95 Umg-1的几丁质纯酶,利用SDS-PAGE得到一个分子量大约为34kDa的单一条带。几丁质纯酶有抑制黑曲霉和白假丝酵母生长的能力;它的最适酶反应温度、pH、盐度分别是50 ℃,8.0和45 g‰ psu,体现了海洋生物酶耐盐耐碱的特点;另外,Mn2+,Co2+,Cu2+,Zn2+和Mg2+都可提高几丁质酶活,而Ca2+,Fe2+和Ba2+能够抑制酶活。通过对几丁质酶动力学常数的考查,胶体几丁质较高的Vmax(0.82 mg product/min·mg protein)和较低的 Km(0.019 mg/mL),证实了胶体几丁质是较为适合的酶反应底物。
其他文献
肉桂醛(CAL)是α,p-不饱和醛中的典型代表,其C=O键选择性加氢产物肉桂醇(COL)在香精香料、生物医药等领域具有广泛的用途,C=C键加氢产物苯丙醛(HCAL)则是抗艾滋病毒(HIV)药物
在炼焦生产过程中除得到主要产品焦炭以外,还产生大量高附加值的副产品,焦炉煤气是其中之一,其主要成分是H2、CH4、CO等,此外还含有少量的N2、CO2、H2S、O2、NH3、C52、CnHn
学位
磷酸铁锂作为新一代锂离子电池正极材料,具有较高的理论比容量,较宽的电化学窗口,较好的热稳定性,低廉的成本和优良的环保性能,因而成为锂离子电池最有前途的正极材料。本文采用固相法、水热法、乳化法和溶胶碳热法制备出橄榄石型的LiFePO_4,针对其固有结构导致的低电子传导性和离子扩散率问题,进行了碳包覆和金属离子(Zn~(2+)、Sr~(2+)、Eu~(3+)、Dy~(3+))体相掺杂改性,对制备出的样
钛及钛合金经过数十年的研发,已经制备出与人骨相近的植入材料。然而,钛表面的生物惰性缺乏与细胞相互沟通作用,限制了其多领域的临床应用。另外,单一的钛表面处理仅能改善细