论文部分内容阅读
目的：银屑病患者皮损间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在体外进行分离、培养及鉴定,明确皮肤MSCs的培养体系,并研究银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的影响、银屑病患者皮损MSCs细胞因子水平及与病变程度的相关性。方法：①分离、培养15例银屑病患者皮损与15例健康人皮肤的单个核细胞,②流式细胞术检测细胞表面标记物CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR③经相应诱导剂诱导细胞,并鉴定多向分化的细胞④采用MTT法,观察MSCs对外周血T细胞增殖的影响⑤ELISA法检测第3代皮肤单个核细胞培养上清液细胞因子水平⑥根据银屑病皮损面积和严重程度的PAS I评分法,经Pearson相关分析、评估细胞因子水平与银屑病病变程度的相关性。结果：①分离、培养MSCs:a.分割皮肤组织成小组织块,置于2.5g/L DispaseII酶、37℃三小时,分离真皮和表皮、弃表皮,将真皮切碎、吹打、过滤、离心、收集细胞,培养至5%C02、37℃培养箱中；b.待细胞贴壁达90%以上,传至第3代；c.倒置显微镜下观察两组MSCs细胞形态相似；②流式细胞仪检测MSCs表面标记物CD29、CD44、CD73、CD90及CD105均呈高表达,而CD34、CD45及HLA-DR呈低表达,证明培养MSCs有较高的纯度；③诱导MSCs可向脂肪细胞、骨细胞及软骨细胞分化④T细胞增殖活性检测结果：银屑病患者皮损及正常皮肤来源的MSCs对外周血T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),而患者皮损MSCs的抑制能力减弱(P<0.05)；⑤与健康人比较,银屑病患者皮损MSCs上清液中IL-11显著增高,而IL-6、HGF降低(P<0.05)；⑥银屑病患者皮损MSCs细胞因子水平与PAS I评分无相关性。结论：①成功分离、培养、鉴定皮肤MSCs,建立了皮肤MSCs的培养体系,为培养皮肤MSCs提供正确、有效的方法；②银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的抑制能力减弱；③银屑病患者皮损MSCs对外周血T细胞增殖的抑制能力减弱可能是通过细胞因子分泌水平异常引起的,而细胞因子水平与PASI评分无相关性,揭示银屑病患者皮损MSCs异常可能参与银屑病的发病。