桑白皮甾醇的提取及功能研究

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桑白皮为桑科桑属植物桑的干燥根皮,是我国卫生部于2002年公布的可用于保健食品的中药之一,主要有利尿、降血压、镇咳、祛痰、平喘、抗炎和降糖等药理作用。植物甾醇是以甾核为骨架、结构上类似于胆固醇的一类甾体化合物,具有降胆固醇、降血脂、抑制肿瘤和抗炎退热等功效。本文以桑白皮甾醇为对象,研究了桑白皮甾醇的提取工艺,对桑白皮甾醇的功能进行了试验。为了获得桑白皮甾醇微波辅助提取工艺条件,分别考查微波功率、微波时间、液固比对桑白皮甾醇得率的影响;采用响应面法优化微波提取工艺,建立了各因素与桑白皮甾醇得率关系的回归方程。结果表明微波功率为539W、微波时间为41s、液固比为35:1(mL/g),此时桑白皮甾醇得率为7.74mg/g。与溶剂法、超声波法相比,微波辅助法的甾醇得率分别提高了1.57%、19.07%,提取时间大大缩短。为了进一步除去桑白皮甾醇粗提液中的杂质,研究了萃取溶剂种类、乙醇粗提液与蒸馏水体积比、萃取时间、乙醇粗提液与萃取溶剂体积比对桑白皮甾醇得率的影响;以乙醇粗提液与氯仿体积比、乙醇粗提液与蒸馏水体积比为试验因素,采用二因素三水平正交试验优化萃取工艺。结果表明与正己烷相比,氯仿萃取使桑白皮甾醇得率提高了46.92%;萃取时间在5-20min内对甾醇得率的影响不显著;萃取工艺条件为乙醇粗提液与氯仿体积比1:1、乙醇粗提液与蒸馏水体积比1:1,此时桑白皮甾醇得率为5.63mg/g。通过对大孔吸附树脂类型的比较,选择D-900大孔吸附树脂进行柱层析两次,桑白皮甾醇含量达50.48%,回收率达75.45%。并且,纯化后桑白皮甾醇氯仿溶液的最大吸收峰为245nm,而β-谷甾醇标准溶液的最大吸收峰244nm;对纯化后样品采用薄层色谱法进行定性分析,纯化样品和p-谷甾醇标准品在同一位置有紫红色斑点析出。采用气相色谱-质谱联用法鉴定,桑白皮纯化样品含有羊毛甾醇、谷甾醇、β-香树脂醇和α-香树脂醇。为了探索桑白皮甾醇的功能,首先测定桑白皮甾醇对亚硝酸盐的清除效果,结果显示质量浓度为0.80mg/mL桑白皮甾醇溶液对亚硝酸盐清除率达到72.65%。接着,初步探讨桑白皮甾醇的抑菌活性及作用机制,采用滤纸片法观察桑白皮甾醇对不同细菌和霉菌的影响,通过测定桑白皮甾醇对大肠杆菌生长曲线、菌体蛋白、电导率的影响,进而研究桑白皮甾醇对大肠杆菌的抑制作用。结果显示桑白皮甾醇对细菌有较强的的抑制作用,其中,对大肠杆菌的抑制作用较强,其次为枯草芽孢杆菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌;对大肠杆菌的最低抑制浓度为10.0mg/mL。另外,桑白皮甾醇对毛霉菌具有较强的抑制作用。质量浓度为10.0mg/mL桑白皮甾醇溶液对大肠杆菌的菌体分裂、菌体蛋白的正常代谢均有明显抑制作用,且引起细胞膜通透性变化。
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