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被子植物双受精过程中的信号转导一直是植物学家关注的热点。早期对植物有性生殖信号途径的研究主要集中在钙信号方面。与此相比，对受精过程中其它信号因子的研究十分有限。近年来，随着IP3/Ca2+信号系统在动物受精和胚胎发育过程中的研究取得进展，PLC/IP3信使系统和植物有性生殖的关系引起了研究者的关注。但是到目前为止，对被子植物双受精和胚胎发育过程中磷脂酶C的参与情况还知之甚少。
本实验室选用具有裸露胚囊的玄参科植物蓝猪耳为材料，研究磷脂酶C是否参与植物的受精和胚胎发育过程。从蓝猪耳胚珠中克隆到2条磷脂酶C基因TfPLC1和TfPLC2,初步分析显示TfPLC1在胚珠中表达量比较高。为了进一步了解TfPLC1的表达调控及功能，本实验克隆了TfPLC1的启动子，构建了植物表达载体，并转化蓝猪耳获得了转基因苗。
通过衔接头PCR技术，我们首先克隆了TfPLC1基因上游1426bp序列。序列分析表明，该序列含有启动子特征序列，如TATA-box，CAAT-box以及AT富含区，而且还含有胚乳特异的AACA域，GCN4域，G盒，醇溶蛋白盒等，初步表明该启动子可能具有启动基因在胚珠高水平表达的功能。在此基础上，我们用pfuTaqDNA聚合酶从蓝猪耳基因组DNA克隆了起始密码子ATG上游712bp和1341bp片段，并将其与衔接头PCR得到的1426bp片段进行比对、拼接、修正，得到1438bp的启动子。启动子与表达载体PBl121构建植物表达载体。结果显示：高保真酶扩增到的片段与衔接头PCR扩增到的片段相似性为99％，表明1438bp序列确实是TfPLC1基因的启动子区域；2个植物表达载体分别命名为PPP702和PPP1331，通过菌液PCR验证了其正确性。植物表达载体首先转化农杆菌LBA4404，筛选阳性转化子后转化蓝猪耳。叶盘法转化经过侵染，共培养，生芽筛选等步骤后，现在已经得到抗性芽。本工作为研究TfPLC1的表达调控及其在胚珠发育和受精过程中的功能奠定了基础。