恶性血液病患者侵袭性真菌感染的早期诊断研究

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目的:侵袭性真菌感染(IFI)是免疫受损患者严重的并发症之一。恶性血液病患者由于接受大剂量化疗及免疫抑制等药物的治疗,长期处于免疫抑制状态,因而成为侵袭性真菌感染的高危人群。本研究旨在统计血液科恶性血液病并发IFI患者的临床特征,探讨早期诊断IFI的实验室检测指标(包括G试验、GM试验、真菌定量PCR)的诊断价值。   材料与方法:选择2008年7月~2009年3月血液科恶性血液病伴发热患者,按照中国血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准(修订版)统计确诊和临床诊断IFI患者的临床特征,定期进行G试验、GM试验和真菌定量PCR检测。采用真菌基因组DNA提取试剂盒提取12株曲霉菌和14株念珠菌菌株验证真菌定量PCR的可靠性,提取患者EDTA抗凝血标本中血浆、淋巴细胞分离液获得的单个核细胞、红细胞裂解液处理后全血中的真菌DNA,通过定量PCR比较三种血液成分中真菌DNA含量的差异。将烟曲霉PCR产物进行纯化、连接pGEM-T载体、经过大肠杆菌克隆后,测序验证并获得真菌DNA标准品,进行定量PCR获得标准品曲线,对血液中真菌拷贝数进行定量测定。   结果:IFI发病率在发热的恶性血液病患者中高达30%(42/140),侵袭性念珠菌病(IC)和侵袭性曲霉菌病(IA)的发病率分别为24.3%(34/140)和9.3%(13/140)。IFI患者中近一半(20/42)为急性白血病患者,骨髓未达到完全缓解患者占59.5%(25/42)。G试验的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值在IA和IC患者分别为0.692,0.667,0.6,0.75和0.594,0.667,0.76,0.48。GM试验敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值在IA患者优于G试验,分别为0.769,0.833,0.769,0.833。IA和IC患者定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为0.778,0.9,0.875,0.818和0.875,0.9,0.933,0.9。真菌在血浆、单个核细胞和全血中的分布无统计学差异(P>0.05)。   结论:IFI在发热的恶性血液病患者中发病率高,念珠菌和曲霉菌是IFI的最常见的两大病原真菌。急性白血病是最容易合并IFI的恶性血液病,骨髓未达到完全缓解是IFI的高危因素。真菌实时定量PCR是早期诊断IFI的实验室检测方法,在IA和IC患者中其敏感性和特异性均优于G试验和GM试验,真菌在血浆、单个核细胞和全血中的分布是相似的,检测血浆中真菌DNA方法更为简便,可作为IFI诊断的初筛试验。
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