溶血磷脂酰胆碱对血管平滑肌细胞的增殖作用及其信号通路

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目的:研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对人血管平滑肌细胞的增殖作用,并阐明其受体介导信号转导机理。   内容培养的人大动脉平滑肌细胞,用LPA和LPC及LPA受体特异性拮抗剂Ki16425和Gi蛋白特异性抑制剂PTX刺激2-3d,MTT比色法观察AoSMCs增殖;实时荧光定量PCR分析LPA受体和Autotaxin的基因表达量;采用蛋白印迹技术检测血管平滑肌细胞在受到L,PA、LPC、Ki16425和PTX刺激后,观察ERK1/2在磷酸化程度上的差别。   结果: MTT法显示LPA、LPC均能促进AoSMCs增殖,且Ki16425和PTX均能抑制它们的增殖作用。荧光定量RT-PCR结果表明,在AoSMCs细胞中,LPA1-5五个受体均有表达,其中LPA1受体的表达量远远高于其它几个受体。Autotaxin基因在血管平滑肌细胞中大量表达,并且显示出很高的磷脂酶D活性,使LPC转化为LPA。Western blot结果表明,用LPA、LPC和PDGF单独刺激AoSMC细胞均能使ERK1/2信号通路活化。与Ki16425同时作用和PTX预处理AoSMC细胞时,LPA和LPC诱导的p-ERK1/2水平明显降低,而PDGF诱导的ERK1/2磷酸化水平未受影响。   结论:1)研究首次发现,血管平滑肌细胞本身表达的Autotaxin参与由LPC刺激细胞的增殖作用。在细胞和细胞培养液中均检测到Autotaxin的蛋白表达和磷脂酶D的活性。2)LPC在胞外通过LPC-LPA1和LPC-LPA-LPA1两种途径激活血管平滑肌细胞LPA1受体,在血管平滑肌细胞内LPC促细胞增殖的信号转导途径是LPA1-Gi-ERK。3)ox-LDL及其中的LPC是引起动脉粥样硬化的重要因子,并控制血液中的ox-LDL浓度对预防和治疗动脉粥样硬化有重要的意义。
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