戊四氮点燃模型大鼠海马苔藓纤维出芽与Cdk5/p35表达的动态变化

• 作 者: 郭婷辉
• 机 构: 中南大学
• 出 处: 中南大学
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 戊四氮 癫痫 苔藓纤维出芽 细胞周期素 依赖性激酶

目的:动态观察细胞周期素依赖性激酶5(Cdk5)及其活性调节亚基p35的mRNA和蛋白在戊四氮(PTZ)点燃模型大鼠海马CAl、CA3区及齿状回颗粒细胞层和门区的表达变化，结合苔藓纤维出芽的动态变化，探讨其在癫痫发生中的作用。
方法:清洁级SD雄性成年大鼠120只，随机分为生理盐水对照组和戊四氮组，戊四氮组连续腹腔注射PTZ 30mg／kg每天一次，对照组同时注射等体积生理盐水。按戊四氮第一次给药后3天、1周、2周、4周和6周在两组内各随机分为5个亚组。每个亚组再按实验方法分为两个小组：一组用于免疫组化和原位杂交，检测各时间点Cdk5／p35蛋白和mRNA在海马CAl、CA3区、齿状回颗粒细胞层和门区的表达；另一组用于Timm染色，检测苔藓纤维出芽情况，每个小组各6只。
结果:
1．动物模型
大鼠多在连续注射PTZ 22~27天后被点燃，平均25.2±1.5天。模型点燃率为95.8％，死亡率为4.2％。达到点燃标准的大鼠，可见自发发作及脑电图痫性波，再次予相同阈下剂量PTZ刺激仍可诱发痫性发作和脑电图痫性波；对照组未出现诱发发作及自发发作，脑电图亦无痫性波。
2．苔藓纤维出芽的动态变化
与对照组相比，戊四氮组各时间点CA3区苔藓纤维出芽评分均有显著性差异。从3天起评分逐渐增加，2周时达高峰并维持至6周。齿状回颗粒细胞上区苔藓纤维出芽评分为O～1分，各时间点之间及与对照组之间比较均无显著性差异。生理盐水对照组苔藓纤维出芽评分仅O～1分，各时间点间无显著性差异。
3．Cdk5／p35的动态表达
Cdk5／p35主要表达在海马CAl、CA3区的锥体细胞、齿状回颗粒细胞和门区神经元中。戊四氮组大鼠上述各区c~5／p35 mRNA在3天时表达即有明显上调，4周内仍维持在较高水平，6周时基本恢复到对照组水平；各区Cdk5／p35蛋白表达从3天起即上调，逐渐增高，2周时最强，其后下调，至6周时接近或达到对照组水平。
4．Cdk5细胞内分布的变化
对照组Cdk5 mRNA和蛋白主要在胞膜和突起表达。戊四氮组从3天到2周，cdk5mRNA和蛋白主要表达在胞浆内，其后表达下降，至6周时主要位于胞膜和突起。
结论:
1.Cdk5／p35可能通过影响突触重建促进癫痫发生。
2.Cdk5参与突触重建可能与其细胞内分布变化有关。