【摘 要】
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DNA甲基化是一种重要的遗传外修饰现象,它在基因转录,胚胎形成及疾病的发生等生命活动中起着重要地作用。人类许多重大疾病如遗传病、传染病、甚至癌症都与DNA甲基化以及甲基
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DNA甲基化是一种重要的遗传外修饰现象,它在基因转录,胚胎形成及疾病的发生等生命活动中起着重要地作用。人类许多重大疾病如遗传病、传染病、甚至癌症都与DNA甲基化以及甲基转移酶的活性密切相关。因此,研究DNA甲基化过程和分析DNA甲基转移酶活性,受到了研究者们的广泛关注。由于传统的方法大都存在费时、DNA消耗大和放射性标记等缺点,因此建立新的简便、经济、灵敏的方法用于DNA甲基化检测及甲基转移酶活性分析已成为临床诊断的迫切需要。本论文拟建立两种高灵敏的电化学发光生物传感方法,用于DNA甲基化检测及甲基转移酶活性分析。该研究可为免疫学分析提供借鉴,对于某些肿瘤的及时发现和早期治疗具有一定的借鉴意义。全文共分三章,主要内容如下：1、主要介绍DNA传感器的种类及应用,综述了DNA甲基化检测方法及其研究进展,简述了本论文的研究内容及意义。2、基于二茂铁淬灭钌联吡啶和金纳米颗粒放大作用,建立了检测DNA甲基化及甲基转移酶活性的新方法。该方法实现了对Dam甲基转移酶的特异性检测,检出限为0.03U/mL,线性范围为0.1～100U/mL,r=0.9954,并且能用于对甲基转移酶敏感药物的筛选。3、基于超级三明治杂交模型,建立了灵敏检测DNA甲基化及甲基转移酶活性的方法。该方法的检出限为3×10-6U/mL,线性范围1.0×10-5-1U/mL,r=0.9956,并且可以实现对甲基转移酶的动力学研究及相关抑制剂筛选。
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