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目的：
查阅和整理相关文献，从中医角度认识心、神以及两者之间的关系，从病因、病机、治法、方药等角度理清中医对失眠的认识，探讨心神与睡眠的关系，以及养心安神法的代表方天王补心方治疗失眠的理论基础。另一方面，从免疫学角度认识睡眠与炎症反应、细胞凋亡的关系。构建失眠大鼠模型，观察天王补心方对失眠大鼠的抗炎症反应和抗细胞凋亡作用。通过理论探讨和实验研究两部分为天王补心方在失眠中的应用提供理论基础和实验依据。
方法：
1.理论探讨:查阅以及整理相关文献，对中医学理论中关于心、神的认识重新梳理，总结归纳心、神以及睡眠这三者之间的关系，明晰心神对人睡眠的影响，探讨养心安神法在失眠中应用。另一方面，收集资料，从免疫学角度认识睡眠与炎症反应、细胞凋亡的关系。
2.实验研究：60只雄性SD大鼠随机分为对照组、造模组。其中，对照组10只，造模组50只。造模组采用腹腔注射PCPA造模，注射剂量为350mg·kg－1，连续造模3d。造模后，从中选取40只依次分为模型组(等容生理盐水)，天王补心丹加减低、中、高剂量组(8.8，17.6，35.2 g·kg－1 ·d－1 )，每组均为10只。借助Morris水迷宫法检测其学习记忆能力;应用免疫荧光染色的方法检测大鼠海马神经元的数量及形态；应用TUNEL染色的方法检测大鼠海马神经元凋亡情况；应用RT-qPCR的方法观察大鼠海马炎性因子IL-21及凋亡调控因子Fas/FasL、Caspase-8、Bcl-2的基因水平变化；应用WesternBlot的方法检测大鼠海马炎性因子IL-21及凋亡调控因子Fas/FasL、Caspase-8、Bcl-2的蛋白表达水平。
结果：
1.造模结果评价：实验开始前大鼠观察指标良好，主要表现为大鼠皮毛顺滑有光泽、精神活跃、运动量良好以及睡眠质量良好。刚开始造模时，部分大鼠出现毛发晦暗枯槁、爪子呈甲白色或淡黄色、精神异常亢奋不睡觉等症状；造模后期，实验组大鼠毛发晦暗粗糙、口唇以及爪甲颜色发白，且大鼠亢奋程度降低、无精打采、双目无神、反应迟钝。而对照组大鼠各项指标均无明显发生改变，对照组大鼠皮毛如前有光泽、摄食以及饮水如前、活动灵活、睡眠良好。对模型评价进行翻正反射法，对造模大鼠腹腔以50mg/kg剂量注射戊巴比妥钠溶液，对大鼠15min的入睡潜伏期以及睡眠维持时间进行观察记录。研究结果显示，模型组大鼠的睡眠维持时间较对照组明显缩短且入睡潜伏期延长明显(P＜0.01)，提示造模成功。
2.Morris水迷宫实验结果：模型组大鼠的平台潜伏期以及游泳总路程较对照组明显延长(P＜0.01)；经低、中、高不同浓度的天王补心丹治疗后，大鼠平台潜伏期以及游泳总路程较模型组明显改善，但仍未达到对照组正常大鼠水平，组间比较存在显著统计差异(P＜0.01)。模型组大鼠跨越圆台次数较对照组显著减少(P＜0.01)，同时模型组大鼠的目标区域运动时间显著缩减(P＜0.01)，首次抵达平台时间显著延长(P＜0.01)；中药各组在给药后越过原平台次数和目标区域时间较模型组均显著增加(P＜0.01)，首次穿越平台时间显著缩短(P＜0.01)。水迷宫实验过程中，中药组大鼠个别可穿越过平台，模型组大鼠极少可穿越平台。
自主活动实验结果：模型组大鼠的活动次数以及活动路程均较对照组高、活动时间也明显延长(P＜0.01)，在低、中、高剂量的天王补心方组中，大鼠活动次数、活动路程以及活动时间较模型组均出现下降(P＜0.05)。
3.免疫荧光染色：神经元数量，与对照组比较，模型组神经元数量明显减少且排列不整齐；与模型组比较，天王补心方组神经元数量都有一定程度增加，且高剂量组增加最明显，中剂量组次之。比较IOD值：模型组IOD值较对照组有所降低；低、中、高剂量天王补心方组较模型组都不同程度升高，且高剂量组增加最明显，中剂量组次之(P＜0.05，P＜0.01)。Density(mean)值比较，与对照组相比，模型组降低明显；与模型组相比，低剂量组降低，中剂量组变化不明显，高剂量组明显升高。
4.TUNEL染色：与对照比较，模型组标记指数和凋亡指数都有升高， 说明睡眠剥夺可能会导致海马神经元细胞凋亡；与模型组比较，低、中剂量组的凋亡指数相对降低，且低剂量组更明显，而高剂量组基本无变化，说明天王补心方有改善神经元凋亡情况的可能(P＜0.01)。
5.RT-qPCR：从表7可以看出，与对照组对比而言，模型组大鼠海马中炎性因子IL-21的mRNA转录水平升高(P＜0.01)。给药后，各组与模型组对比而言，IL-21的mRNA转录水平下降，其中低、中剂量组仍高于对照组，高剂量组低于对照组(P＜0.01)。
相比于对照组，模型组大鼠海马凋亡调控因子Fas、FasL、Caspase-8的mRNA转录水平升高(P＜0.01)。给药后，中药组与模型组对比而言，凋亡调控因子Fas、FasL、Caspase-8的mRNA转录水平下降，其中低、中剂量组仍高于对照组，高剂量组低于对照组(P＜0.01)。调控因子Bcl-2的mRNA转录水平，与对照组比较，模型组下降明显(P＜0.01)；给药后，天王补心丹低、中、高剂量组均上升，其中低、中剂量组仍低于对照组，高剂量组高于对照组(P＜0.01)。
6.WesternBlot：大鼠海马中炎性因子IL-21的蛋白表达水平：模型组IL-21蛋白表达水平较对照组明显升高；中药组IL-21的蛋白表达水平较模型组均有下降，且剂量越高越明显(P＜0.01)。凋亡调控因子Fas/Fasl的蛋白表达水平：与对照组相比，模型组的表达水平明显升高；与模型组比较，中药组Fas/Fasl的蛋白表达水平均有下降，且高剂量组最明显，中剂量组次之(P＜0.01)。调控因子Caspase-8的蛋白表达水平：与对照组相比，模型组的表达水平明显升高；与模型组比较，中药组Caspase-8的蛋白表达水平均有下降，且剂量越高越明显(P＜0.01)。调控因子Bcl-2蛋白表达水平：模型组较对照组的Bcl-2蛋白表达水平明显降低；中药组Bcl-2的蛋白表达水平较模型组都有一定程度升高，高剂量组升高最明显，中剂量组次之，但中药组蛋白表达水平仍低于对照组(P＜0.01)。
结论：
1.心为生之本，乃五脏六腑之大主，神主宰生命机能，是睡眠功能的主导基础；睡眠调节中，心神发挥了至关重要的作用，与此相配合的还有营卫气血以及五脏神等功能运转正常。故而养心安神法在调节睡眠中具有十分重要的意义。
2.腹腔注射PCPA失眠大鼠模型存在可复制性。
3.本研究所选择的天王补心方为养心安神法之中最具代表性方剂，可对失眠模型大鼠发挥镇静催眠的功效，可对其睡眠状态产生良好的改善作用。
4.基于养心安神法的天王补心方可对失眠模型大鼠的睡眠质量发挥明显改善作用，且还可改善大鼠的学习记忆能力，这可能与其调控失眠大鼠海马IL-21介导的炎症反应及Fas/FasL介导的神经元凋亡有关。
查阅和整理相关文献，从中医角度认识心、神以及两者之间的关系，从病因、病机、治法、方药等角度理清中医对失眠的认识，探讨心神与睡眠的关系，以及养心安神法的代表方天王补心方治疗失眠的理论基础。另一方面，从免疫学角度认识睡眠与炎症反应、细胞凋亡的关系。构建失眠大鼠模型，观察天王补心方对失眠大鼠的抗炎症反应和抗细胞凋亡作用。通过理论探讨和实验研究两部分为天王补心方在失眠中的应用提供理论基础和实验依据。
方法：
1.理论探讨:查阅以及整理相关文献，对中医学理论中关于心、神的认识重新梳理，总结归纳心、神以及睡眠这三者之间的关系，明晰心神对人睡眠的影响，探讨养心安神法在失眠中应用。另一方面，收集资料，从免疫学角度认识睡眠与炎症反应、细胞凋亡的关系。
2.实验研究：60只雄性SD大鼠随机分为对照组、造模组。其中，对照组10只，造模组50只。造模组采用腹腔注射PCPA造模，注射剂量为350mg·kg－1，连续造模3d。造模后，从中选取40只依次分为模型组(等容生理盐水)，天王补心丹加减低、中、高剂量组(8.8，17.6，35.2 g·kg－1 ·d－1 )，每组均为10只。借助Morris水迷宫法检测其学习记忆能力;应用免疫荧光染色的方法检测大鼠海马神经元的数量及形态；应用TUNEL染色的方法检测大鼠海马神经元凋亡情况；应用RT-qPCR的方法观察大鼠海马炎性因子IL-21及凋亡调控因子Fas/FasL、Caspase-8、Bcl-2的基因水平变化；应用WesternBlot的方法检测大鼠海马炎性因子IL-21及凋亡调控因子Fas/FasL、Caspase-8、Bcl-2的蛋白表达水平。
结果：
1.造模结果评价：实验开始前大鼠观察指标良好，主要表现为大鼠皮毛顺滑有光泽、精神活跃、运动量良好以及睡眠质量良好。刚开始造模时，部分大鼠出现毛发晦暗枯槁、爪子呈甲白色或淡黄色、精神异常亢奋不睡觉等症状；造模后期，实验组大鼠毛发晦暗粗糙、口唇以及爪甲颜色发白，且大鼠亢奋程度降低、无精打采、双目无神、反应迟钝。而对照组大鼠各项指标均无明显发生改变，对照组大鼠皮毛如前有光泽、摄食以及饮水如前、活动灵活、睡眠良好。对模型评价进行翻正反射法，对造模大鼠腹腔以50mg/kg剂量注射戊巴比妥钠溶液，对大鼠15min的入睡潜伏期以及睡眠维持时间进行观察记录。研究结果显示，模型组大鼠的睡眠维持时间较对照组明显缩短且入睡潜伏期延长明显(P＜0.01)，提示造模成功。
2.Morris水迷宫实验结果：模型组大鼠的平台潜伏期以及游泳总路程较对照组明显延长(P＜0.01)；经低、中、高不同浓度的天王补心丹治疗后，大鼠平台潜伏期以及游泳总路程较模型组明显改善，但仍未达到对照组正常大鼠水平，组间比较存在显著统计差异(P＜0.01)。模型组大鼠跨越圆台次数较对照组显著减少(P＜0.01)，同时模型组大鼠的目标区域运动时间显著缩减(P＜0.01)，首次抵达平台时间显著延长(P＜0.01)；中药各组在给药后越过原平台次数和目标区域时间较模型组均显著增加(P＜0.01)，首次穿越平台时间显著缩短(P＜0.01)。水迷宫实验过程中，中药组大鼠个别可穿越过平台，模型组大鼠极少可穿越平台。
自主活动实验结果：模型组大鼠的活动次数以及活动路程均较对照组高、活动时间也明显延长(P＜0.01)，在低、中、高剂量的天王补心方组中，大鼠活动次数、活动路程以及活动时间较模型组均出现下降(P＜0.05)。
3.免疫荧光染色：神经元数量，与对照组比较，模型组神经元数量明显减少且排列不整齐；与模型组比较，天王补心方组神经元数量都有一定程度增加，且高剂量组增加最明显，中剂量组次之。比较IOD值：模型组IOD值较对照组有所降低；低、中、高剂量天王补心方组较模型组都不同程度升高，且高剂量组增加最明显，中剂量组次之(P＜0.05，P＜0.01)。Density(mean)值比较，与对照组相比，模型组降低明显；与模型组相比，低剂量组降低，中剂量组变化不明显，高剂量组明显升高。
4.TUNEL染色：与对照比较，模型组标记指数和凋亡指数都有升高， 说明睡眠剥夺可能会导致海马神经元细胞凋亡；与模型组比较，低、中剂量组的凋亡指数相对降低，且低剂量组更明显，而高剂量组基本无变化，说明天王补心方有改善神经元凋亡情况的可能(P＜0.01)。
5.RT-qPCR：从表7可以看出，与对照组对比而言，模型组大鼠海马中炎性因子IL-21的mRNA转录水平升高(P＜0.01)。给药后，各组与模型组对比而言，IL-21的mRNA转录水平下降，其中低、中剂量组仍高于对照组，高剂量组低于对照组(P＜0.01)。
相比于对照组，模型组大鼠海马凋亡调控因子Fas、FasL、Caspase-8的mRNA转录水平升高(P＜0.01)。给药后，中药组与模型组对比而言，凋亡调控因子Fas、FasL、Caspase-8的mRNA转录水平下降，其中低、中剂量组仍高于对照组，高剂量组低于对照组(P＜0.01)。调控因子Bcl-2的mRNA转录水平，与对照组比较，模型组下降明显(P＜0.01)；给药后，天王补心丹低、中、高剂量组均上升，其中低、中剂量组仍低于对照组，高剂量组高于对照组(P＜0.01)。
6.WesternBlot：大鼠海马中炎性因子IL-21的蛋白表达水平：模型组IL-21蛋白表达水平较对照组明显升高；中药组IL-21的蛋白表达水平较模型组均有下降，且剂量越高越明显(P＜0.01)。凋亡调控因子Fas/Fasl的蛋白表达水平：与对照组相比，模型组的表达水平明显升高；与模型组比较，中药组Fas/Fasl的蛋白表达水平均有下降，且高剂量组最明显，中剂量组次之(P＜0.01)。调控因子Caspase-8的蛋白表达水平：与对照组相比，模型组的表达水平明显升高；与模型组比较，中药组Caspase-8的蛋白表达水平均有下降，且剂量越高越明显(P＜0.01)。调控因子Bcl-2蛋白表达水平：模型组较对照组的Bcl-2蛋白表达水平明显降低；中药组Bcl-2的蛋白表达水平较模型组都有一定程度升高，高剂量组升高最明显，中剂量组次之，但中药组蛋白表达水平仍低于对照组(P＜0.01)。
结论：
1.心为生之本，乃五脏六腑之大主，神主宰生命机能，是睡眠功能的主导基础；睡眠调节中，心神发挥了至关重要的作用，与此相配合的还有营卫气血以及五脏神等功能运转正常。故而养心安神法在调节睡眠中具有十分重要的意义。
2.腹腔注射PCPA失眠大鼠模型存在可复制性。
3.本研究所选择的天王补心方为养心安神法之中最具代表性方剂，可对失眠模型大鼠发挥镇静催眠的功效，可对其睡眠状态产生良好的改善作用。
4.基于养心安神法的天王补心方可对失眠模型大鼠的睡眠质量发挥明显改善作用，且还可改善大鼠的学习记忆能力，这可能与其调控失眠大鼠海马IL-21介导的炎症反应及Fas/FasL介导的神经元凋亡有关。