【摘 要】
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目的：探讨信号转导和转录活化因子1(signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入体内转染肺纤维化大鼠的可行性并给予鉴定。 方法：根据
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目的：探讨信号转导和转录活化因子1(signal transducer and activator of transcription 1，STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入体内转染肺纤维化大鼠的可行性并给予鉴定。
方法：根据大鼠STAT1基因的碱基序列设计合成硫代修饰的反义寡核苷酸，5’端异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)标记。取20只体重为180-200g的雌性Wistar大鼠，气管内灌注博莱霉素7天后，随机分为生理盐水(normalsaline，NS)组5只、脂质体(liposome，LP)组5只、反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides，ASON)组10只，其中ASON组又分为2个亚组。NS组、LP组和ASON组分别于气管内灌注博莱霉素第7天、9天、11天、13天隔日雾化吸入生理盐水(NS组)、DOTAP(LP组)、DOTAP-ASON复合物(ASON组)，共雾化吸入4次，其中ASON组5只大鼠雾化全硫代磷酸修饰的STATI-ASON，5只大鼠雾化全硫代磷酸修饰并5’端FITC标记的STAT1-ASON。3组大鼠于气管内灌注博莱霉素第14天处死，其中ASON组中雾化5’端FITC标记的STAT1-ASON的5只大鼠于雾化完5～6小时后处死。通过支气管肺泡灌洗液收集肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage，AM)，肺组织作冰冻切片，在荧光显微镜下观察，了解STAT1-ASON是否进入了AM和肺组织内。应用实时荧光定量聚合酶联反应(real time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction，FQ-PCR)检测AM中STAT1/ICAM-1mRNA的表达。并检测血清肝肾功能指标，收集支气管肺泡灌洗液作细胞总、分数检测，肺组织常规石蜡包埋，切片，HE染色，肺组织病理学检查。
结果：荧光显微镜观察见AM和肺组织中可见黄绿色荧光。NS组、LP组、ASON组血清肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以及肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)两两比较差异无统计学意义(P＞0.05)。FQ-PCR结果显示：NS组和LP组相比，AM中ICAM-1、STAT1mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)；NS组、LP组与ASON组相比，AM中ICAM-1、STAT1mRNA表达水平差异有统计学意义(P＜0.05)。ASON组与NS组相比，ICAM-1、STAT1mRNA表达水平显著F降，抑制率分别达73.29％、73.35％。支气管肺泡灌沈液细胞总、分数测定结果显示：NS组与LP组细胞总、分数差异无统计学意义(P＞0.05)；NS组和LP组分别与ASON组比较其差异均有统计学意义(P＜0.05)：ASON组细胞总数减少，巨噬细胞比例增加，中性粒细胞、淋巴细胞比例减少。肺组织病理学检查发现：NS组和LP组肺泡炎程度较重：肺泡壁增厚，肺泡腔及肺泡壁有较多炎症细胞浸润，病变区域肺泡萎缩。而ASON组肺泡炎程度相对较轻：肺泡壁轻度增厚，肺泡腔及肺泡壁炎症细胞浸润相对较少，病变区域肺泡轻度萎缩。
结论：脂质体包裹的STATl-ASON雾化吸入能达到AM和肺组织内，对大鼠肝肾功能无明显毒副作用，用于体内实验是安全的；STAT1-ASON体内转染后，能抑制AM中ICAM-1、STAT1mRNA的表达，并能改善肺泡炎症，说明STAT1-ASON雾化吸入体内转染动物模型成功。
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