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目的:本课题通过研究苗药皮部熏洗疗法对骨关节炎(osteoarthritis OA)大鼠痛行为(pain behaviors)及p53、bcl-2、增殖细胞核抗原(ProliferatingCell Nuclear Antigen,PCNA)、转移生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的影响,进一步探讨苗药皮部熏洗法治疗骨关节炎的部分机理。并通过熏法、洗法单独应用对照比较,研究它们治疗OA的疗效差别,为此疗法的推广应用提供实验依据,并为治疗骨关节炎提供新的思路和方法。
方法:取42只健康清洁级大鼠,随机选取8只不造模作为正常对照组,其余34只采用4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,一周后随机选取2只检测模型成功与否,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、熏组、洗组和熏洗组,治疗4周后处死动物,切取关节,大体及组织学观察,取各组胫骨平台关节软骨,采用HE染色进行Mankins评分,免疫组化染色法测定p53、bcl-2、PCNA及TGF-β1的表达。
结果:大体观察模型组肉眼即可观察到关节软骨表面的改变,光镜下观察正常组:关节软骨4层结构清晰,软骨面光滑、完整,软骨细胞排列整齐,基质染色均匀;模型组:滑膜部分呈结节样增生,软骨细胞减少,软骨下骨暴露,骨赘形成,血管增生明显,潮线不完整或消失;熏组及洗组:软骨表面稍不平整,裂隙少,细胞排列较规则,增生明显,潮线模糊;熏洗组:软骨表面光滑、完整,细胞排列规则,结构层次清晰,潮线清楚。Mankins评分结果显示:与模型组比较,各治疗组均降低Mankins评分(P<0.05,P<0.01),且熏洗组与熏组、洗组相比具极显著性差异(P<0.01)。各治疗组痛阈显著升高(P<0.05),熏洗组升高最明显,具有显著性差异(P<0.01)。正常组大多数标本未见p53与bcl-2表达,造模后见到散在的p53与bcl-2表达,熏洗后bcl-2的表达有逐渐增强、p53的表达有逐渐减弱的趋势;正常组有少量PCNA和TGF-β1阳性细胞的表达,模型组中表达明显,治疗组均比模型组升高(P<0.05),其中熏洗组与模型组比有极显著性差异(P<0.01)。
结论:(1)通过苗药皮部熏洗防治的干预,对OA模型大鼠的痛行为及膝关节活动有明显的改善作用。(2)苗药皮部熏洗通过上调软骨bcl-2的表达和下调p53的表达,来延缓软骨细胞的凋亡;并通过上调软骨PCNA和TGF-β1的的表达,促进软骨细胞的增殖,加速软骨的修复,达到防治OA的目的。(3)熏洗法治疗大鼠OA比单独运用熏法、洗法效果更明显。