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目的:黑色素瘤是一种致死率极高的恶性皮肤癌,但目前仍缺乏有效的化疗药物。Sasanquasaponin是山茶科中一种重要的成分,已被证明在乳腺癌和肝癌细胞中具有有效的抗肿瘤作用。由此,我们将从Schima crenata Korth中分离的化合物进行筛选,发现SQSⅢ对黑色素瘤细胞具有较好的抗肿瘤活性。因此,本研究旨在探讨SQSⅢ是否具有抗黑素瘤活性,并研究SQSⅢ对黑色素瘤的潜在的抗肿瘤作用机制。方法:(1)通过MTT和CCK8实验检测细胞活力测定SQSⅢ对A375细胞的增殖抑制作用。(2)通过Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡的发生。(3)通过JC-1染色实验检测SQSⅢ作用后A375细胞的线粒体膜电位的变化。(4)使用DCFH-DA探针在酶标仪下检测SQSⅢ作用后活性氧(ROS)的产生量。(5)使用透射电子显微镜(TEM)监测细胞凋亡的形态改变以及自噬小体形成等自噬过程。(6)使用GFP-LC3质粒转染实验观察SQSⅢ是否诱导自噬小体积累。(7)使用GFP-LC3和LAMP1共定位免疫荧光实验检测SQSⅢ作用后A375细胞中自噬小体和溶酶体的融合。(8)DQ-BSA染色实验测定SQSⅢ作用后对A375细胞溶酶体降解的影响。(9)使用Mito-Tracker和GFP-LC3共定位实验验证线粒体和细胞自噬间的联系。(10)通过蛋白质印迹分析细胞凋亡、自噬以及Akt/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果:我们的结果表明,SQSⅢ可以有效地抑制人黑色素瘤A375细胞的生长增殖。SQSⅢ处理后的黑素瘤细胞出现细胞凋亡形态,且凋亡率上升,caspase蛋白被激活并且PARP被切割。SQSⅢ不仅导致线粒体膜电位下降,且对Bcl-2家族蛋白水平有明显的影响,因而推断其可能触发线粒体凋亡途径。Western blot结果表明,SQSⅢ启动的线粒体凋亡途径可能是由caspase 8介导的Bid切割刺激死亡受体激活引起的。透射电镜观察显示SQSⅢ在A375细胞中诱导了自噬的发生。SQSⅢ诱导后自噬标志物GFP-LC3以及自噬关键蛋白表达增多,自噬小体-溶酶体的融合和溶酶体降解上调。另外,ROS积累通常被认为是诱导线粒体凋亡途径和细胞自噬发生的关键因素,而且充当两者的联系纽带,而研究的结果也证明这一点,SQSⅢ诱导的细胞凋亡和自噬都可被ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)逆转,说明ROS的积累是凋亡和自噬的重要关联因子。此外作用机制研究显示,SQSⅢ处理后所引起的细胞自噬主要是通过抑制AKT/mTOR信号通路实现,而且,自噬抑制剂3MA在A375细胞中逆转了SQSⅢ引起的细胞毒性和细胞凋亡,表明自噬可能在促进SQSⅢ诱导的细胞凋亡的过程中扮演重要的角色。结论:SQSⅢ可通过诱导A375细胞激活死亡受体并激活线粒体从而导致凋亡,且SQSⅢ通过抑制Akt/mTOR通路诱导细胞发生自噬从而起到抗肿瘤作用,而这两者都是由SQSⅢ诱导的胞内ROS积累所致。因此,SQSⅢ具有诱导黑色素瘤细胞凋亡和自噬的活性,这为其成为抗黑色素瘤先导化合物提供了科学依据,为进一步开发SQSⅢ及其类似物成为新型抗肿瘤药物奠定了基础。