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背景:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。其病因是BCR-ABL融合蛋白具有强烈酪氨酸激酶活性,能激活多条癌性信号通路引起造血细胞恶性转化,是CML的始发因素。靶向BCR-ABL的第一、二代酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)已经广泛应用于临床,然而以imatinib(IM)为代表的TKIs出现化疗耐药已成为其治疗的最主要障碍,这严重影响了CML患者的长期疗效。我们前期研究发现,IM耐药CML细胞(K562/G01)中Bcl-x基因发生异常剪接大量转录生成Bcl-x L,而Bcl-x S相应减低,致Bcl-x L/Bcl-x S比值显著增高,由此可见,Bcl-x基因的异常剪接参与CML进展。现已证实Bcl-x基因的异常剪接事件与多种肿瘤细胞的化疗抵抗密切相关,Bcl-x L抗凋亡蛋白的过表达和Bcl-x S促凋亡蛋白的低表达均直接增强肿瘤细胞的化疗抵抗能力。由此可见,通过调控K562/G01细胞内Bcl-x L和Bcl-x S的表达量,将是改善其对IM化疗抵抗的途径之一。Vivo-Morpholinos(v MO)技术是近年发展起来的一种能实现体内、外直接调控靶基因选择性剪接的高效方法。因此,本研究设想应用v MO技术靶向调控Bcl-x基因的异常剪接,在减少Bcl-x L生成的同时增加Bcl-x S的表达,实现对Bcl-x L和Bcl-x S双向、同时调控,将能有效逆转K562/G01细胞对IM耐药。目的:探讨v MO靶向纠正Bcl-x异常剪接在耐药CML细胞中的增敏作用,为耐药CML患者治疗提供新的思路。方法:荧光标记的v MO技术与K562/G01细胞进行共培养,在不同时间通过流式细胞术和荧光显微镜检测荧光染色细胞百分率;K562/G01细胞经IM组(2μM),v MO组,对照试验的随机序列(RS-v MO),IM+v MO组及不处理(空白对照)处理后培养48h,通过CCK8法检测靶向调控Bcl-x剪接对K562/G01细胞活性与药物敏感性试验的影响;流式细胞术测定靶向调控Bcl-x剪接对K562/G01细胞凋亡的影响;通过q PCR和western blot分别检测K562/G01细胞胞内Bcl-x L、Bcl-x S m RNA和蛋白表达量。结果:(1)v MO(8μl)在48h后能够成功高效转染K562/G01细胞;(2)RS-v MO对K562/G01细胞几乎无毒性作用;与单独IM处理组相比,IM+v MO明显抑制K562/G01细胞活性,且细胞的IC50也显著降低,增加其对IM的敏感性;同时v MO增加IM诱导的K562/G01凋亡。(3)q PCR及western-blot均发现,IM+v MO技术可以双向、同时调控Bcl-x剪接模式,使Bcl-x L表达量明显降低的同时Bcl-x S表达量显著升高。结论:本研究证实v MO联合IM可以靶向纠正Bcl-x异常剪接,显著下调Bcl-x L/Bcl-x S凋亡蛋白的比值,逆转K562/G01细胞对IM耐药,为临床治疗CML及其他伴Bcl-x剪接异常的肿瘤的化疗增敏提供理新思路。