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桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)是一种危险性果蔬害虫,常见于热带及亚热带地区,其食性广,适应能力强,已被多个地区和国家当作检疫性害虫而加以隔离,对国际贸易造成了诸多限制。目前,桔小实蝇的防控以化学药剂为主,然而幼虫一旦在果内产卵危害,药剂喷洒难以奏效,同时将导致严重的环境污染和食品安全问题。因此,发掘绿色、安全的新型药剂作用靶标势在必行。保幼激素(Juvenile hormone,JH)在昆虫的生长发育、变态、生殖等生理过程中均发挥重要作用。保幼激素酸甲基转移酶(Juvenile hormone acid O-methyl-transferase,JHAMT)是保幼激素合成过程中重要的调控酶。本研究以桔小实蝇基因组及转录组数据为基础,克隆获得了BdJHAMT和BdJHAMT-like的开放阅读框序列,明确了BdJHAMT和BdJHAMT-like与其他昆虫同源序列的系统进化关系;并利用qPCR解析了BdJHAMT和BdJHAMT-like的时空表达模式,基于免疫组化开展了BdJHAMT的组织定位;采用高效液相色谱技术,明确了桔小实蝇各发育阶段的JH Ⅲ滴度谱;最终通过饲喂法RNAi干扰探究了BdJHAMT在桔小实蝇幼虫生长发育中的生理功能。具体研究结果如下:1桔小实蝇BdJHAMT和BdJHAMT-like ORF的克隆及序列分析根据桔小实蝇基因组和转录组数据库,克隆获得BdJHAMT和BdJHAMT-like的ORF序列。并通过ClustalW、TMHMM等生物信息学软件发现,BdJHAMT和BdJHAMT-like编码蛋白均具有保守的SAM结合位点。利用软件MEGA 5.0构建的系统发育树分析发现,BdJHAMT氨基酸序列与双翅目昆虫亲缘关系更近,而BdJHAMT-like与膜翅目昆虫亲缘关系更近。2桔小实蝇BdJHAMT和BdJHAMT-like的时空表达模式解析利用qRT-PCR解析了BdJHAMT和BdJHAMT-like在桔小实蝇不同发育阶段的表达模式。其中BdJHAMT在桔小实蝇预蛹、羽化初期及9日龄成虫期表达水平较高;而BdJHAMT-like在雄成虫表达波动不大,在9日龄雌成虫高表达。两者在幼虫期表达量均较低。不同组织表达模式分析解析发现,BdJHAMT在幼虫中肠和成虫咽侧体转录水平较高,而BdJHAMT-like在雌成虫脂肪体和中肠有较高表达。后通过免疫组化,在蛋白水平验证了BdJHAMT在成虫咽侧体有特异性表达信号,同时在初龄幼虫肠道和肠壁细胞检测到荧光信号。3桔小实蝇不同发育阶段的JH滴度谱为探究桔小实蝇JH Ⅲ滴度与BdJHAMT时空表达模式间的关系,构建了基于高效液相色谱法的桔小实蝇JH Ⅲ滴度检测体系。结果表明,JH Ⅲ滴度在桔小实蝇不同发育阶段呈规律性波动。其中,成虫期JH Ⅲ滴度远高于幼虫与蛹期,且蛹期JH Ⅲ滴度极低。桔小实蝇在化蛹初期与羽化初期JH Ⅲ滴度处上升趋势,结果与BdJHAMT的mRNA表达模式一致。4 BdJHAMT在桔小实蝇幼虫生长发育中的功能解析通过比较注射法和饲喂法RNAi发现,仅饲喂法RNAi可以有效沉默桔小实蝇BdJHAMT基因。BdJHAMT沉默导致桔小实蝇初龄幼虫生长发育显著滞后,同时JH Ⅲ滴度显著下降;高浓度烯虫酯处理能够拯救BdJHAMT沉默带来的幼虫表型缺陷,从而恢复体长发育。