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目的：卵巢癌是危害女性健康的三大妇科恶性肿瘤之一，而卵巢上皮性癌占卵巢癌的90％，由于缺乏有效的治疗方法，75％的患者就诊时已属晚期。因此，寻找有效地抑制肿瘤生长、诱导凋亡，及增强化疗药物作用的机制成为当前卵巢癌治疗研究的重要课题。近年来，具有低毒、高效的独特优势的天然药物越来越受到国内外学者的广泛关注，灵芝孢子是一种天然植物产品，已被广泛应用于肿瘤方面的治疗。体内外试验表明灵芝孢子具有明显抗肿瘤活性。国内外研究报道灵芝孢子对乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、胃癌、直肠癌、前列腺癌、白血病、肝癌、黑色素瘤等肿瘤细胞的生长、侵袭、转移能力有明显的抑制作用。细胞周期素G2(cyclin G2)负向调控细胞周期，它主要通过与PP2A结合发挥作用，阻滞细胞周期G1/S期的进行并影响细胞动力学稳定性；微小RNAlet-7通过与原癌基因RAS、HMGA2和c2MYC的3UTR结合，负调控靶标基因的表达，抑制肿瘤的发生发展。为探讨灵芝孢子对裸鼠卵巢癌细胞体内生长的抑制、诱导凋亡及增强化疗药物作用的机制，本课题以人卵巢癌移植瘤为研究对象，以破壁灵芝孢子粉提取物为处理因素，应用光学显微镜观察法、免疫组化法、实时荧光定量PCR方法等，对其进行研究，并检测实验组和对照组瘤体组织中cyclin G2、let-7的表达情况。目的在于：①研究破壁灵芝孢子提取物对裸鼠卵巢上皮性癌细胞的生长抑制作用、诱导凋亡作用及其机制。②研究破壁灵芝孢子粉提取物增强化疗药物紫杉醇作用的机制。为灵芝孢子的进一步开发以及在卵巢上皮癌的临床应用提供理论依据。 方法：⑴细胞培养：体外常规培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV3用含10％胎牛血清(Sigma公司产品)、1％青霉素链霉素(Invitrogen公司产品)的RPMI1640培养基(上海英骏生物技术有限公司产品)在37℃，5％CO2，饱和湿度环境下培养箱中培养。⑵破壁灵芝孢子粉工作液制备：加拿大energene天然药品有限公司提供的破壁灵芝孢子粉溶于双蒸水DD-H2O配制成75mg/ml的灵芝孢子储存液。高温灭菌、离心后取上清，用0.20μm微孔滤膜过滤器过滤除菌，保存于4℃冰箱。⑶实验动物模型的建立及分组：采用BALB/C/nu/nu无胸腺裸小鼠，共24只，雌性，4-5周龄，体重16～20g。购于北京军事医学科学院实验动物中心，饲养于无菌试验室的净化空气层流架中。常规消化收集对数生长期细胞，计数活细胞数，并调整细胞浓度为25×106/ml。消毒裸鼠注射部位皮肤，用注射器抽取细胞悬液0.2ml，接种于裸鼠背侧近后肢处来建立裸鼠移植性人卵巢上皮性癌模型，随机分为对照组、灵芝组、紫杉醇组及灵芝+紫杉醇组。⑷给药方法及浓度：接种一周后开始给药，对照组每天灌胃相同体积0.9％氯化钠注射液；破壁灵芝孢子粉按浓度500mg/kg给予灵芝组裸鼠灌胃，连续四周；紫杉醇按30mg/kg给予紫杉醇组裸鼠腹腔内注射，一周一次，连续四周；灵芝+紫杉醇组同时给予灵芝孢子和紫杉醇(浓度和给药方法同上)，连续四周。⑸检测指标：每天观察裸鼠饮食，精神、体重变化，每七天测量移植瘤的最长径(a)及最短径(b)根据公式计算肿瘤体积；末次给药后24小时将裸鼠处死，分别计算抑瘤率，制作组织切片光镜下观察细胞形态改变，qRT-PCR方法测量let-7的表达，免疫组化法检测cyclin G2的表达。⑹应用SPSS统计软件进行数据分析。应用方差分析及t检验进行组间比较。 结果：①用药后实验组抑瘤率的大小：通过测量各组肿瘤体积大小，采用多组间方差分析比较各组瘤体体积变化情况为对照组瘤体体积增大最明显，灵芝+紫杉醇组瘤体体积增大最慢，自第28天起差异具有统计学意义(P<0.05)；比较各组平均瘤重发现对照组平均瘤重高于实验组，其中灵芝+紫杉醇组平均瘤重最低，差异具有统计学意义P=0.026(P<0.05)。通过各组的平均瘤重计算抑瘤率发现灵芝+紫杉醇组高于紫杉醇组和灵芝组。②各组瘤体组织形态学改变：各组瘤体组织通过HE染色光镜下可见对照组瘤细胞明显异型性：上皮排列失去极性，核大小不一，染色深，染色质为团块状，有明显核仁，核分裂像多见，间质极少。灵芝组、紫杉醇组瘤细胞异型性程度较低，灵芝+紫杉醇组瘤细胞异型性程度最低。③免疫组化测量cyclinG2的阳性表达情况：在实验组瘤体组织细胞胞浆内可见较多棕黄色颗粒cyclin G2呈高表达；在对照组细胞胞浆内可见少量的棕黄色颗粒，cyclin G2呈低表达；其中灵芝+紫杉醇组表达最高，灵芝组高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。④qRT-PCR测量let-7的表达情况：let-7在实验组呈高表达，在对照组呈低表达，通过t检验分析在各组中阳性表达率如下：灵芝+紫杉醇组表达最高，对照组表达最低，有显著差异性(P<0.05)。 结论：⑴通过方差分析方法来处理各组裸鼠肿瘤的平均体积和瘤重的变化数据以及计算各组用药后的抑瘤率，表明灵芝孢子提取物具有抑制裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的作用。⑵各组肿瘤组织中cyclinG2的表达情况为实验组均高于对照组，其中灵芝+紫杉醇组表达最高，灵芝组高于对照组，差异有统计学意义，提示破壁灵芝孢子粉提取物具有诱导裸鼠卵巢上皮性癌细胞凋亡的作用。⑶通过qRT-PCR测量各组肿瘤组织中的let-7表达情况发现实验组均高于对照组，其中灵芝+紫杉醇组高于紫杉醇组，且具有统计学意义。表明破壁灵芝孢子提取物能够抑制裸鼠卵巢上皮性癌细胞的增殖并增强化疗药物紫杉醇的作用。