【摘 要】
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目的：构建hBMP2真核表达载体pcDNA3-hBMP2，将其转染体外培养状态下的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)，并检测hBMP2基因在兔BMSCs中的表达效率。 方法：体外培养兔BMSCs，HindⅢ、XbaⅠ双
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目的：构建hBMP2真核表达载体pcDNA3-hBMP2，将其转染体外培养状态下的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)，并检测hBMP2基因在兔BMSCs中的表达效率。
方法：体外培养兔BMSCs，HindⅢ、XbaⅠ双酶切含有hBMP2全长cDNA的pSP6-hBMP2，回收900bp片段，将其用T4DNA连接酶连入真核表达载体pcDNA3，形成重组真核表达载体pcDNA3-hBMP2。酶切鉴定后，用脂质体转染试剂FuGENE6体外转染培养状态下的兔BMSCs，用原位杂交和免疫组织化学方法鉴定表达情况并用计算机图象分析系统测定其表达效率。用碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞经转染后ALP合成的变化。
结果：pcDNA3-hBMP2载体酶切鉴定结果与预期片段相符，表明成功构建了pcDNA3-hBMP2转基因载体。在脂质体转染试剂FuGENE6介导下，pcDNA3-hBMP2被成功转染到兔BMSCs。原位杂交检测结果证实基因在阳性细胞中进行了转录。免疫组织化学检测结果证实目的基因在阳性细胞中进行了翻译。用该载体转染兔BMSCs后获得了瞬时表达和稳定表达。转染pcDNA3-hBMP2后的兔BMSCs合成ALP的能力得到显著提高，与未经转染pcDNA3-hBMP2的BMSCs相比差异有显著性(P＜0.01)。
结论：在FuGENE6的介导下，载体pcDNA3-hBMP2可以转染入BMSCs并在其中表达，hBMP-2基因转染能够促进体外培养的BMSCs向成骨细胞转化，可用于以BMSCs为种子细胞的组织工程化骨组织的构建。
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