蜂毒素-SP94融合蛋白原核表达载体的构建、表达及其纯化

• 作 者: 曹静
• 机 构: 河南师范大学
• 出 处: 河南师范大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 蜂毒素 靶向头SP94 融合蛋白 表达载体

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,目前的治疗手段主要采用放疗、化疗和手术,但放疗和化疗在杀伤恶性细胞时对正常细胞也造成了严重损害。靶向治疗则使分子药物特异性结合到肿瘤细胞的某些作用位点,选择性杀死肿瘤细胞而不杀伤或仅很少损伤正常组织与细胞,克服了传统治疗存在的弊端,因而肝癌的靶向治疗近年来成为研究热点。　　
蜂毒素是一类存在于蜜蜂毒中的抗菌肽,由26个氨基酸组成,具有抗炎、抗关节炎、抗菌、抗病毒等方面的作用,单独使用时有毒性,为达到减毒增效的目的,本实验选择蜂毒素和可以特异性结合到肿瘤细胞表面的靶向头SP94连接形成融合蛋白,根据大肠杆菌密码子偏好性改造碱基序列,其中加入限制性内切酶KpnI和XhoI,以便构建重组载体pET32a-蜂毒素-SP94,然后原核表达融合基因,制备出纯化的融合蛋白,为肝癌的靶向治疗研究与临床应用提供新的思路。　　
利用经过PCR扩增得到的融合基因蜂毒素-SP94,构建了融合表达载体pET32a-蜂毒素-SP94,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组蛋白的表达,经金属亲和层析、透析除盐、肠激酶酶切后,进行冷冻干燥,制备出纯化的融合蛋白。　　
对构建的重组载体pET32a-蜂毒素-SP94进行融合型表达,结果表明PET32a-蜂毒素-SP94重组载体在大肠杆菌中高效表达,得到较理想的可溶性蛋白,重组蛋白约占细胞总蛋白的30％,超声破碎后50％的重组蛋白以可溶性形式存在。SDS-PAGE分析显示重组蛋白大小与预期理论值一致,纯化酶切后获得高纯度蜂毒素-SP94蛋白。因此,PET32a-蜂毒素-SP94重组载体可以用于融合蛋白蜂毒素-SP94的规模制备,为肝癌的靶向治疗提供新的候选药物蛋白。