课题一:DST通过CD47-SIRPα信号负调控树突状细胞诱导移植耐受的机制研究;课题二:不同时期低位直肠癌根治手术保肛率的变化及其影响因素分析

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第一部分:建立用于研究供体细胞CD47表达对DST影响的移植模型[研究目的]本研究首先验证B6-bml小鼠皮肤移植模型用于DST研究的可行性,同时也比较了来源于供体CD47 WT和CD47 K0 B6小鼠的皮肤移植物在受体bm1小鼠上的存活时间。[材料与方法]选择CD47 WT或CD47 KO的B6小鼠为供体;bm1小鼠为受体;B10.A小鼠用于第三方皮肤移植物。 第二部分:CD47的表达对DST诱导小鼠皮肤移植物长期存活的影响[研究目的]本研究首先分析了供体细胞CD47的表达对DST的诱导皮肤移植物存活时间的影响;并进一步通过流式细胞测定、免疫组化和MLR等方法检测受体体内免疫细胞活性的变化及输注的供体细胞在受体内的分布与存活情况。旨在获得DST诱导供体特异性的免疫耐受,进而延长小鼠皮肤移植物存活时间的可靠证据。 第三部分:混合CD47 WT和CD47 KO供体细胞的DST对小鼠皮肤移植物存活的影响[研究目的]了解混合CD47 WT和CD47 KO供体细胞的DST对小鼠皮肤移植物存活的影响及其引起受体体内免疫细胞活性的变化。 第四部分:多次DST对小鼠皮肤移植物存活的影响[研究目的]评估多次CD47 KO-DST后受体外周血中微嵌合体水平及其对小鼠皮肤移植物存活的影响。 第五部分:DST联合MR1对小鼠皮肤移植物存活的影响[研究目的]评估联合应用MR1和CD47 KO-DST对皮肤移植物存活的影响。 [结论] 1. CD47 WT-DST能明显延长小鼠皮肤移植物存活时间,而无论单次CD47KO—DST还是多次CD47 KO-DST都加快排斥;混合CD47 WT和CD47 KO供体细胞的DST部分削弱了CD47 WT-DST诱导耐受的作用;CD47 KO-DST部分削弱了DST联合MR1诱导耐受的作用;因此,供体细胞表达CD47在DST诱导免疫抑制和免疫耐受的作用中足必不可少的。 2. CD47 KO-DST使受体内DC上CD86和MHC-II表达水平上调,引起DC的成熟和活化,并进一步促进受体CD8+T细胞的增殖和活化。 3.行DST后CD47 KO的供体脾细胞很快被受体清除,多次CD47 KO-DST也不能加强受体外周血中微嵌合体水平。 4.首次提出DST诱导免疫耐受的新机制:CD47-SIRPα引发负性调节信号,负反馈调控DC的成熟和活化,抑制其抗原呈递作用,诱导供体特异性T细胞耐受。 5.首次提出DST不能诱导异种移植的免疫耐受的理论基础:不同种属间的CD47和SIRPα不能匹配,也就不能发挥其负调节信号的作用。 结直肠癌的发病率和死亡率仍处于上升趋势,随着生活水平的不断提高,患者对医疗质量的要求也愈来愈高,不仅要求手术后长期生存,还要有良好的生存质量。在低位直肠癌手术的选择上,保留肛门括约肌(sphincter preserving,SP),即保留患者健全的排便控制能力,向来是结直肠肛门外科医生关注的重点。 低位直肠癌保肛手术的基本原则必需遵循: (1)保证肿瘤的根治性;(2)术后肛门排便和控制功能良好;(3)保肛手术尤其要重视保留盆腔自主神经,以改善病人的排尿及性功能,提高术后生存质量;(4)肠管远断端无癌残留。 TME能有效提高保肛率的原因有: (1)传统低位直肠癌手术因害怕撕裂骶前血管,分离直肠时往往止于直肠骶骨筋膜;而TME在直视下离断直肠骶骨筋膜后,能使直肠延伸3-5 cm,完全游离,此时可较准确地评估肿瘤下缘与肛直肠环的距离及肛管括约肌是否能完全保留,作为是否选作保肛手术的依据,使原先以为切除后无法吻合的病例有了恢复连续性的可能。 (2)为保证手术的根治性,直肠系膜的远端切缘要求超过肿瘤下缘5 cm。建立在TME基础上的超低位前切除术,其远端直肠横断水平取决于直肠系膜切除水平而不取决于肿瘤位置,在一定程度上提高了低位直肠癌的保肛率。可以认为,TME在有效提高低位直肠癌保肛手术的成功率中是极为重要的环节,但并不是唯一因素。TME原则的合理实施,使保肛手术的肿瘤根治得到保证,可适当增加保肛手术的比例,但TME并不是保肛手术。 [结论] 1.行APR的比例逐年减少,而SP逐年上升。 2.保肛手术的影响因素有:肿瘤下缘距齿状线距离、性别、不同时期、肿瘤周径和分化程度的差异有统计学意义。而年龄、大体分型、Dukes分期对保肛率无明显影响。 3.全直肠系膜切除术在一定程度上提高了低位直肠癌的保肛率,且明显减少了术中输血量,并未延长手术时间、也未增加吻合口瘘的发生率。
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