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MicroRNA(miRNA)是一种长约22个核苷酸的小的、非编码RNA,它通过与靶基因mRNA的3’UTR区5-8个碱基的完全或部分互补结合来负调控靶基因的表达。microRNA参与多种生物学过程,包括发育、分化、凋亡、脂肪代谢癌症等而且研究人员推测人类中三分之一的基因都受到miRNA的调控。对于已经发现的miRNA,首要任务是如何预测并鉴定这些miRNA的基因靶点,从而获得其真正的生物学功能,这对以miRNA为基础的肿瘤基因治疗策略具有重要的意义。
mir-17-92簇是一种在癌组织中发现其表达上调的miRNAs。mir-17-92簇包括7个miRNAs:miR-17-5p,miR-17-3p,miR-18,miR-19a,miR-20,miR-19b-1 and miR-92-1。mir-17-92簇位于人类染色体13q31区域。研究结果显示mir-17-92簇可能做为潜在的致癌基因。已经有文献报道细胞周期转录因子E2F1是miR-17和miR-20的靶基因,E2F1和mir-17/20之间形成自动反馈调节环。寻找miR-17-92的靶基因对以miRNA为基础的肿瘤基因治疗策略具有重要的意义。通过生物信息学分析发现蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)的mRNA的3UTR区有与miR-17-92碱基互补配对的保守区域。PTPRO作为一个重要的酪氨酸磷酸酶,是一个候选的肿瘤抑制基因,具有重要的生理功能,但是对PTPRO的研究还处在起步阶段,PTPRO的转录调控机制还不清楚。我们实验室已经证明了转录因子E2F1在转录水平调控PTPRO基因的表达,本文主要研究mir-17-92在转录后水平对PTPRO基因的表达调控。在293T细胞中转染含有PTPRO-3’UTR的荧光素酶报告基因质粒,PTPRO-3’UTR野生型的报告基因活性低于PTPRO-3’UTR突变体的报告基因活性。另外mir-17-92簇过表达可以使PTPRO在mRNA以及蛋白水平都下调。本研究表明蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)是miR-17-92的一个靶基因,mir-17-92在转录后水平调控PTPRO基因表达。