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毒力相关基因toxR广泛分布于弧菌属细菌中，该基因最先在霍乱弧菌中被报道，后来陆续在副溶血弧菌、创伤弧菌、鳗弧菌、拟态弧菌、溶藻弧菌等多种弧菌中均证实存在该基因。目前对霍乱弧菌研究表明该基因编码的跨膜转录调控蛋白ToxR参与调控一些主要毒力基因和外膜蛋白的表达。附属定殖因子基因acfs是弧菌重要毒力基因之一，其表达产物是病原有效定植在宿主肠道上所必需的蛋白。研究表明，acfs在霍乱弧菌基因组中以基因簇形式与其它一些毒力基因串联排列，以调控霍乱毒素CT及其它一些病原菌定植所必需蛋白的合成。本研究以溶藻弧菌HY9901为对象，利用分子生物学技术，成功克隆了溶藻弧菌毒力调控相关基因toxR和附属定殖因子acfA的基因全序列，并对其进行了生物信息学分析。结果表明：toxR基因的ORF为879bp，编码292aa，相对分子量为32.9kDa，等电点为4.68，为酸性蛋白；acfA基因的ORF为648bp，编码215aa，该基因5上游未发现原核生物基因应具体的-35区和-10区序列。演绎蛋白的相对分子量为22.2kDa，等电点为为4.53，为酸性蛋白。序列分析发现ToxR蛋白在位点179-196处有一18aa的跨膜结构域，没有信号肽，有7个氨基酸残基活性位点；AcfA的N末端有一信号肽，有5个氨基酸残基活性位点，这些氨基酸残基活性位点可能对于维持各自蛋白三维结构及活性功能有重要的意义。以pRE112自杀质粒为载体，应用插入失活突变法成功构建了溶藻弧菌ΔtoxR、ΔacfA两株突变株，并利用Overlap PCR与同源重组技术构建其对照株，研究了两个突变株的致病相关的表型变化和毒力变化，同时利用2D-DIGE电泳技术寻找表达差异蛋白。结果表明toxR的插入突变对溶藻弧菌的胞外蛋白酶的产量和生物膜的形成影响，但对于弧菌的生长、鞭毛几乎没有影响；acfA对溶藻弧菌多种生理功能具有显著的调控作用，能促进生长晚期的弧菌生长；对生物膜的形成也具有明显的抑制作用，同时还能调控胞外蛋白酶活性。其中最明显的是对弧菌鞭毛形成有显著影响。2D-DIGE电泳结果分析表明toxR或acfA的插入突变仅能影响溶藻弧菌部分能量代谢蛋白、转运蛋白、结构蛋白及调控蛋白的表达的上调或下调，但对主要毒力蛋白表达的影响不显著。野生株、突变株对石斑鱼LD50分析表明toxR的插入突变能影响溶藻弧菌对毒力，但统计表明野生株、突变株的毒力差异不显著。本实验研究结果为进一步研究溶藻弧菌基因组中其它可能的毒力基因提供了一个有效的插入失活技术平台，同时为研究溶藻弧菌的致病机理奠定基础。