【摘 要】
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背景和目的:多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一种B淋巴细胞淋巴瘤。由于其具有易复发且难治的临床问题,急需新的治疗方法。目前针对BCMA为靶点的免疫疗法已出现一些进展。抗体药物偶联物（ADCs）由于其靶点明确,技术成熟等优点,一直是肿瘤治疗领域的研究热门,随着Genentech/ImmunoGen联合开发的首个针对实体瘤的抗体偶联药物Ado-trastuzumabemtans
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背景和目的:多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一种B淋巴细胞淋巴瘤。由于其具有易复发且难治的临床问题,急需新的治疗方法。目前针对BCMA为靶点的免疫疗法已出现一些进展。抗体药物偶联物（ADCs）由于其靶点明确,技术成熟等优点,一直是肿瘤治疗领域的研究热门,随着Genentech/ImmunoGen联合开发的首个针对实体瘤的抗体偶联药物Ado-trastuzumabemtansine（T-DM1,商品名Kadcyla）被FDA批准用于HER2阳性乳腺癌,使ADC药物再次受到了青睐。2020年8月,首个以BCMA为靶点的belantamab-mafoodin被美国食品及药品管理局（FDA）批准上市,更给多发性骨髓瘤的ADC研究带来希望。抗体药物偶联物由靶向肿瘤相关抗原的抗体、小分子毒性药物以及化学链接子三部分组成,截至目前已经有许多针对多发性骨髓瘤的ADC药物已被证实对多发性骨髓瘤有显著疗效,且已进入临床试验阶段。本实验基于本实验室筛选出的以往研究成果上,在装于PAYZ载体的BCMA序列基础上进行调整,通过基因工程技术构建并表达针对BCMA为靶点的anti-BCMA（fab）-LDM,并初步探究该抗体偶联药物的抗肿瘤活性。方法:合成基因重组质粒pAYZ anti-BCMA（Fab）-LDP,通过酶切电泳对其进行鉴定,鉴定正确的质粒转化入大肠杆菌进行融合蛋白的表达,对其进行粗纯、透析、纯化、离心得到产物后经AKTA层析仪,Protein G亲和层析柱进行纯化,浓缩,最终得到纯品抗体。进行SDS-PAGE分析和western blot鉴定;运用流式细胞术（FACS）和双光子共聚焦显微镜技术检测表达产物与多发性骨髓瘤细胞H929细胞的结合活性,并与商品抗体比较竞争H929细胞表位的能力,采用免疫荧光法,检测融合蛋白的内化特性;检测强化融合蛋白anti-BCMA（Fab）-LDM 对多发性骨髓瘤 H929 细胞的靶向杀伤活性结果。结果:通过基因克隆技术成功的构建并表达了 anti-BCMA（Fab）-LDP融合蛋白,经纯化后检测得到该融合蛋白的相对分子质量约为65 kDa。同时,通过流式细胞术检测证明该融合蛋白具有一些生物学特性即能够与表达BCMA的细胞特异性结合,且在一定浓度下能够与商品抗体竞争H929细胞的抗原表位,免疫荧光法检测表明该融合蛋白能够介导细胞内化等。将辅基蛋白LDP与发色团相连得到强化融合蛋白anti-BCMA（Fab）-LDM后,通过实验证明了其具有较强细胞毒性且能够对肿瘤细胞进行杀伤。结论:我们构建的抗体偶联药物anti-BCMA（Fab）-LDM蛋白可以靶向BCMA分子,作用于表面有BCMA分子表达的B淋巴瘤细胞,并通过细胞毒作用对肿瘤细胞进行杀伤,展现出较强的抗肿瘤活性,因此在多发性骨髓瘤的治疗中具有潜在的应用前景。
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