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猫杯状病毒（Feline calicivirus,FCV）是一种高度传染性的病原体。它能引起猫常见的口腔和呼吸道传染病,主要表现为口腔溃疡、鼻炎、结膜炎和上呼吸道疾病等临床症状。强毒株致死率达50%以上,严重危害猫的健康。由于FCV的广泛流行,造成变异毒株的不断产生,现有疫苗的保护效力也在不断下降,因此开展FCV遗传进化分析及治疗性药物的研究具有重要意义。目前,临床上依然没有有效药物来治疗感染FCV的猫,需要开发安全、有效的治疗性的药物。Ig G约占免疫球蛋白总量的75%,是体液免疫应答过程中产生的血清中含量最高的抗体,具有特异性中和抗原、激活补体、结合受体等多种功能,因此,它是被动免疫治疗的首选。在抗血清被动免疫疗法中,为了克服完整的抗体分子与具有Fc受体的细胞结合所引起的非特异性反应和由其抗原性所引起的过敏反应,常用Fab片段或F（ab’）2代替完整抗体分子。因此,本研究首先分离鉴定FCV流行毒株并开展遗传进化分析及致病性研究。将筛选出的毒力强、效价高、与国内近年流行株同源性高的毒株进行全基因序列测定,动物发病模型的建立。同时制备FCV灭活疫苗免疫动物,制备高效价F（ab’）2抗体并开展纯化研究,为开发FCV治疗性抗体打下基础。本研究由三个阶段组成:1.FCV分离鉴定及遗传进化分析与致病性试验本研究通过RT-PCR方法对2017年～2019年南宁市宠物医院、猫舍、花鸟市场采集的55份疑似FCV样品进行检测,获阳性样品10份,阳性率为18.2%。将阳性样品接种猫肾传代细胞（F81）后,有5份出现FCV引起的典型的细胞病变（CPE）。通过测序和BLAST比对,确定为FCV,共获得5株FCV流行株,分别命名为GXN1、GXN2、GX2019、GXN4、GXN5。通过测定5株流行株的TCID50,选择其中3株效价高的毒株进行遗传进化分析。结果发现3株分离株与目前临床上使用的国内疫苗株255、国外疫苗F9株处于不同的进化分支,存在疫苗免疫失败的风险。动物致病性试验发现GX2019株致病力最强。综合分析,GX2019用于下一步研究。2.FCV-GX2019分离株全基因序列测定及动物发病模型的建立按照常规方法设计3对引物对GX2019全基因进行分段扩增,经拼接获得大小为7687 bp的目的基因序列,将GX2019株全基因上传至Gen Bank,获得的载录号为MK867378。遗传进化分析发现该毒株与吉林分离株CH-JL4亲缘关系最近,与国内疫苗株255及国外疫苗株F9相比较,与抗原表位相关的一些关键氨基酸位点发生了变化,这可能导致疫苗保护率下降。为了构建动物发病模型,将病毒稀释成不同的滴度采用滴鼻途径接种试验猫。结果显示,以FCV-GX2019株不同剂量感染猫后,攻毒组猫表现出发热、眼角分泌物增多、舌面溃疡灶、体重减轻等临床症状,感染第3 d拭子检测出FCV阳性,7 d后试验猫有死亡情况出现。攻毒14 d后测定ID50=10-2.5,LD50=10-1.5,肺脏出现出血、淤血;组织病理切片观察到肺泡壁增厚、肺泡腔红细胞及炎性细胞渗出等典型FCV临床及病理变化,证实动物发病模型的构建。3.抗FCV免疫球蛋白F（ab’）2的制备与纯化大量培养GX2019病毒并测定TCID50。将病毒用甲醛灭活后与吐温-80混合制成水相,白油、司本-80和硬脂酸铝熬煮制成油相,将水相和油相用匀浆器混合均匀制成油乳灭活疫苗。经过安全性检测后,皮下注射免疫兔,颈部和臀部多点肌肉注射免疫马,免疫后采血进行血清中和效价的测定及血清中FCV-Ig G抗体含量测定,采血后离心分离出血清用正辛酸-硫酸铵沉淀法进行Ig G的纯化,测出蛋白浓度,接着用亲和层析方法将酶解所得样品通过Protein A+G层析柱,分离出F（ab’）2片段,测出免疫球蛋白F（ab’）2蛋白浓度和中和效价,计算F（ab’）2回收率,并通过SDS-PAGE电泳验证和安全无菌性检测。