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本研究分为三部分：
第一部分:经皮穿刺瘤内注射CALE治疗兔移植性VX2瘤疗效研究
目的:观察经皮穿刺局部注射CALE和其组成成分对兔移植性VX2肿瘤的治疗效果，评价CALE和其组成成分的作用。
材料与方法:
一、种植瘤模型制作新西兰大白兔14只，采用瘤细胞混悬液局部注射接种法，于左、右大腿肌肉内穿刺接种VX2瘤株。行B超观察种植瘤生长情况，14～16天后瘤块直径达2cm以上瘤灶作为实验瘤模型。
二、治疗药剂的配制及治疗方法本研究主要使用三种药剂：
①单纯碘油：超乳化碘油；
②化疗药物溶液：将阿霉素、丝裂霉素及卡铂三种粉剂溶解于4ml非离子造影剂中；
③CALE：将阿霉素、丝裂霉素及卡铂加入造影剂和碘化油(两者体积比1:1)4ml内，充分混匀乳化。
三、实验分组及处理
1.分组及治疗满足治疗条件的移植性VX2瘤模型兔14只，按瘤灶内注射药物成份不同随机分4组。
①碘油组：4只8个瘤灶，分别行经皮穿刺瘤内一次性注射超乳化碘油(2ml／瘤)。
②化疗药物组：4只8个瘤灶，分别行经皮穿刺瘤内一次性注射化疗药物溶液(2ml／瘤)。
③CALE组：4只8个瘤灶，分别经皮穿刺瘤内一次性注射CALE(2ml／瘤)。
④对照组：2只4个瘤灶，未治疗，作为病理对照。
2.术后观察处理
①观察实验兔反应、活动及进食情况。
②治疗术后7天处死实验兔，解剖分离瘤灶，观察各组瘤体大体标本、坏死情况并计算肿瘤坏死率。
③瘤灶取材固定：行病理学光镜(HE染色)、电镜观察；以免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原(prolifcratingcellnuclearantigens,PCNA)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrothfactor,VEGF)的表达。
四、统计学分析统计学处理应用SPSS13.0统计软件，计量资料用mean±SD，多组间比较采用完全随机设计的方差分析(onewayANOVA)；P≤0.05为差异有统计学意义。
结果:
一、动物模型制作及治疗：VX2瘤株双侧大腿内侧肌肉内接种成功率100％，接种16天，瘤灶大小平均2.3±0.25cm；B超显示肿瘤血供丰富。在静脉全麻及B超引导下行瘤块局部穿刺及注药，治疗成功率100％。
二、术后观察
(一)、一般情况各组实验兔治疗术后反应、活动及进食情况与术前相比均无明显变化。
(二)、病理观察
1.大体观察
①对照组(未治疗)：肿瘤外观呈灰白色结节，类圆形；切面呈灰红色，鲜嫩呈鱼肉样，有光泽，无坏死。
②经皮瘤内注射治疗术后7d，经治疗之三组均有不同程度的治疗改变。
③坏死率：经测量肿瘤坏死径线，计算各组肿瘤坏死率分别为：碘油组：2.22±0.56％；化疗药物组：7.25±0.82％；CALE组：27.02±3.46％；
2.光镜及电镜观察
(1)HE染色光镜检查对照组：VX2瘤组织病理切片见肿瘤呈浸润性生长，肿瘤细胞排列紊乱，呈巢状分布，胞核大而浓染，核质颗粒粗，部分核呈异形，胞界不清。
(2)透射电镜观察对照组：VX2瘤肿瘤细胞形态不规则，细胞核增大，核浆比增大，核形状可见异形，核周浓染，胞浆内可见大量扩张的内质网及线粒体，细胞膜结构完整。
3.瘤组织PCNA及VEGF免疫组织化学法表达PCNA阳性染色为细胞核膜周围及核内被染成黄色或棕黄色，呈颗粒状或弥漫，PCNA阳性细胞呈弥漫性、片状或散在分布，PCNA分别为对照组76.50±1.67％。
结论:
1.制作大腿内侧肌肉内移植性兔VX2模型简单，成功率高，血供较丰富，类似人类结节型恶性实体癌瘤，位置表浅便于观察及治疗等实验研究。B超是一种简便、有效的检测查监测手段。
2.采用经皮穿刺瘤内注射局部消融的方法，单纯碘油和化疗药物对肿瘤均有一定的治疗作用；CALE提高了药物在局部存留的时间和浓度，增强了局部消融强度，可引起明显的肿瘤组织坏死，治疗效果最明显。
第二部分：经皮瘤内注射CALE治疗兔移植性VX2瘤的机制研究
目的:探讨经皮穿刺瘤内注射CALE治疗恶性实体肿瘤的作用机理。
材料与方法:
一、种植瘤模型制作新西兰大白兔16只，种植瘤模型制作及监测同第一部分相仿。
二、治疗药剂的配制及治疗方法本部分使用CALE为治疗药剂：其配制、用法用量及治疗方法同第一部分。
三、实验分组及处理
1.分组及治疗满足治疗条件的移植性VX2瘤模型兔16只，按瘤内注射CALE治疗术后处死时间不同随机分成4组，分别行经皮穿刺瘤内注射CALE(2ml／每瘤)。
2.术后观察处理
①观察实验兔经皮瘤内注射CALE术后反应、活动及进食情况。
②各组分别于治疗术后30min、1d、7d及14d处死，解剖分离瘤灶取材固定。
③7d组及14d组共8只治疗兔，分别于注射CALE治疗前、治疗后7d抽取外周血备检(检测血常规、肝功能)。
四、统计学分析统计学处理应用SPSS13.0统计软件，计量资料用mean±SD，治疗前、后外周血指标比较采用配对T检验；P≤0.05为差异有统计学意义。
结果:
一、动物模型制作及治疗：与第一部分相仿。
二、术后观察
(一)、各组实验兔治疗术后反应、活动及进食情况与术前相比均无明显变化。
(二)、病理动态变化
1.大体观察治疗后30miln组：瘤灶外观颜色及质地无明显改变，中心切面注射区可见类圆失去光泽呈灰白色；
2.石蜡切片HE染色治疗后30min组，瘤组织水肿，局部微血管充血、扩张，瘤细胞肿胀。
3.冷冻切片苏丹III染色瘤细胞核蓝染，碘油呈鲜红色。
4.透射电镜30min组，瘤细胞呈大片溶解坏死，胞膜消失，细胞间边界不清，细胞器正常结构消失，胞浆内或胞核周围可见明显“脂滴”样空泡，核膜皱缩、模糊不清或消失，可见裸核，部分胞核染色质异常聚集成团，部分胞核碎裂，核染色质断裂。
(三)、外周血血常规及肝功主要指标7d组及14d组共8只治疗兔，经检测外周血血常规(WBC、HGB及PLT)及肝功(TB和ALT)，统计比较示治疗前及治疗术后7天各主要指标无显著性差异(均为P>0.05)。
结论:
经皮穿刺瘤内注射CALE消融的机制是：
①破坏了瘤细胞赖以生存的微环境，阻碍了癌细胞与组织液进行物质交换，特别是养分和氧的获取，引起细胞酸中毒，溶酶体膜破裂，DNA受损。同时引起脂质崩解和细胞骨架的破坏，直至细胞死亡。
②CALE局部存留及弥散，可在一定范围内长期而持久地发挥其化疗药物及碘油的双重的细胞毒性作用。
③通过瘤细胞的吞饮作用，CALE内携带的碘油和化疗药逐渐进入胞浆内，进一步发挥化疗药的细胞毒作用，致其破裂溶解，进而发生核固缩、碎裂引起细胞坏死。
④CALE可抑制肿瘤细胞和组织的PCNA和VEGF的生成和表达，从而有效抑制肿瘤组织的生长和侵袭。
第三部分：经皮瘤内注射CALE治疗兔移植性VX2瘤的安全性评价
目的：结合前两组评价经皮穿刺瘤内注射CALE治疗恶性实体瘤的安全可行性。
材料与方法：
1.分组及治疗总共6只正常兔(未接种瘤株)，分别行经皮穿刺双侧大腿肌肉内(2只)、肝脏内(2只)及腹腔内(2只)注射CALE2ml。
2.术后观察处理
①观察实验兔术后反应、活动及进食情况。
②治疗术后7天处死实验兔，解剖分离标本，行大腿肌肉、肝脏及腹腔内靶区病理学大体观察。
③注射区取材固定：行石蜡切片HE染色光镜观察。
结果：
一、一般情况本组2只经腹腔内注射CALE者，术后3天内反应、活动及进食均较术前略差，后逐渐好转，至7天时完全恢复正常。肝脏及大腿肌肉内注射者术后实验动物反应、活动及进食情况与术前相比均无明显变化。
二、CALE对正常组织的毒性观察：
1.大体观察
①肝脏注射区：注射术后7天肝脏注射区外观呈局限灰白色，与周围肝组织分界较清楚，切面质地软化，可见境界较清灶性坏死，坏死区颜色变灰黄。
②肌肉注射区：注射术后7天肌肉外观呈局限暗红色、肿胀，质地略变软；切面可见境界较清灶性液化坏死，坏死区颜色暗红。
③腹腔内腹膜及肠管未见明显异常。
2.石蜡切片HE染色光镜检查
①肝脏注射区肝小叶及肝板正常结构形态破坏消失，细胞破裂溶解，注射区边缘可见微血管充血、扩张，肝细胞肿胀、气球样变。
②肌肉注射区注射区肌肉组织呈片状坏死，肌细胞破裂溶解，肌纤维碎裂；边缘区见肌细胞肿胀，部分肌纤维断裂。
③因腹膜及胃肠包膜大体观察未见明显异常，故未取材行病理检查。
结论：
结合本课题前二部分术后一般情况观察及外周血相关各主要指标的检测的结果，综合评价显示该法创伤小，并发症少，毒副反应较轻。具有较高的安全可行性。