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目的:1.建立LC-MS/MS定量分析方法同时测定大鼠血浆中野黄芩苷、氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334的浓度,并考察灯盏生脉胶囊和氯吡格雷合用后对大鼠体内药物动力学影响。2.通过研究灯盏生脉胶囊与氯吡格雷合用对大鼠血小板聚集的影响,评价两药合用的药效。3.通过研究灯盏生脉胶囊与氯吡格雷合用对小鼠出、凝血时间的影响,探讨两药合用的安全性。方法:1.建立准确、灵敏的LC-MS/MS定量分析方法同时测定野黄芩苷、氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334在大鼠血浆中的浓度。将SD大鼠随机分为3组,分别是氯吡格雷组、灯盏生脉胶囊组和氯吡格雷加灯盏生脉胶囊组,均为灌胃给药,研究灯盏生脉胶囊和氯吡格雷合用对大鼠体内药动学的影响。2.雄性SD大鼠56只,随机分为8组,每组7只,即正常对照组(等体积蒸馏水),氯吡格雷组,灯盏生脉胶囊低剂量组,灯盏生脉胶囊中剂量组,灯盏生脉胶囊高剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊低剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊中剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊高剂量组,均为灌胃给药,连续7 d,于末次给药1 h后腹主动脉取血测定血小板聚集率。3.BALB/c小鼠80只,雌雄各半,随机分为8组,每组10只,即正常对照组(等体积蒸馏水),氯吡格雷组,灯盏生脉胶囊低剂量组,灯盏生脉胶囊中剂量组,灯盏生脉胶囊高剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊低剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊中剂量组,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊高剂量组,均为灌胃给药,连续7d,于末次给药1 h后进行出、凝血实验。结果:1.氯吡格雷的血药浓度线性范围为0.14～72.00ng·mL-1(γ>0.999),最低定量下限为 0.14ng·mL-1。SR26334 的血药浓度线性范围为 8.80～4500.OOng·mL-1(γ>0.999),最低定量下限为8.80ng·mL-1。野黄芩苷的血药浓度线性范围为1.31～670.00ng·mL-1(γ>0.999),最低定量下限为1.31ng·mL-1。氯吡格雷、SR26334和野黄芩苷的基质效应均在86～101%,提取回收率、日内和日间考察均符合生物样品分析要求。2.大鼠在灌胃氯吡格雷、氯吡格雷加灯盏生脉胶囊组药液后,氯吡格雷的血药浓度低,在给药后0.5 h达到了最大血药浓度值,然后血药浓度骤降,表明氯吡格雷代谢迅速。与氯吡格雷组比较,氯吡格雷的AUC00-t有所下降,MRT0-∞和t1/2明显增加,但无统计学意义(P>0.05),Cmax的降低和MRT0-t的升高均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),提示氯吡格雷与灯盏生脉胶囊合用可降低氯吡格雷的血药浓度和延长体内平均驻留时间。3.大鼠在灌胃氯吡格雷、氯吡格雷加灯盏生脉胶囊组药液后,SR26334的血药浓度迅速升高,在给药后0.5 h达到了最大血药浓度值。与氯吡格雷组比较,SR26334的AUC0-t和Cmax略有减少,MRT0-∞、Tmax和t1/2有明显的增加,但无统计学意义(P>0.05),AUC0-∞和MRT0-t无明显变化。实验结果表明,大鼠单次灌胃氯吡格雷加灯盏生脉胶囊药液,对SR26334的药动学行为影响不大,但有延长SR26334达峰时间、体内平均驻留时间,增加半衰期的趋势。4.大鼠在灌胃灯盏生脉胶囊、氯吡格雷加灯盏生脉胶囊组药液后,野黄芩苷的平均血药浓度-时间曲线图出现了多峰现象。与灯盏生脉胶囊组比较,野黄芩苷的t1/2、Tmax、Cmax无明显的变化,AUC0-t和MRT0-t有所增加,AUC0-∞ MRT0-∞明显升高,由于受试动物的个体差异大,AUC0-∞和MRT0-∞均无统计学意义(P>0.05)。5.大鼠血小板聚集实验结果表明,给药组均能明显降低大鼠血小板聚集率,具有统计学意义(P<0.05)。与氯吡格雷组比较,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊中、高剂量组均能明显降低大鼠的血小板聚集率,具有统计学意义(P<0.05)。实验结果说明氯吡格雷与灯盏生脉胶囊合用,可增强氯吡格雷抗ADP诱导的血小板聚集作用。随着灯盏生脉胶囊剂量增大,血小板聚集抑制率也随着升高。6.小鼠凝血实验:与正常对照组比较,给药组均对小鼠凝血时间的影响具有统计学意义(P<0.01)。与氯吡格雷组比较,灯盏生脉胶囊高剂量组、氯吡格雷加灯盏生脉胶囊各剂量组均能明显增加小鼠的凝血时间,有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。实验结果表明氯吡格雷与灯盏生脉胶囊合用,可延长凝血时间,并能增强氯吡格雷的抗凝血作用。小鼠出血实验:与正常对照组比较,给药组的出血时间均明显延长,具有统计学意义(P<0.01)。与氯吡格雷组比较,氯吡格雷加灯盏生脉胶囊中、高剂量组明显增加小鼠的出血时间,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。实验结果提示,氯吡格雷与灯盏生脉胶囊合用,在辅以低剂量的灯盏生脉胶囊的情况下,可减少或避免出现出血的不良反应,若与大剂量的灯盏生脉胶囊合用,不但延长了出血时间,同时也增加了出血的风险。结论:建立LC-MS/MS定量分析方法同时测定大鼠血浆中野黄芩苷、氯吡格雷及其羧酸代谢物SR26334的浓度,并考察灯盏生脉胶囊和氯吡格雷合用后对大鼠体内药物动力学的影响。药动学研究表明,灯盏生脉胶囊与氯吡格雷合用后对大鼠体内药动学行为有一定的影响,合用后Cmax显著降低,MRT0-t明显升高,具有统计学意义,提示氯吡格雷与灯盏生脉胶囊合用可能会降低氯吡格雷的血药浓度和延长体内平均驻留时间。灯盏生脉胶囊与氯吡格雷合用可增强抗ADP诱导的血小板聚集作用,并随着灯盏生脉胶囊剂量增大,血小板聚集抑制率也随着升高。两药合用虽增强了氯吡格雷抗凝血的作用,但随着灯盏生脉胶囊的剂量增大,出血的危险性也同时增加。灯盏生脉胶囊与氯吡格雷两药合用产生药-药相互作用,提示灯盏生脉胶囊与氯吡格雷临床上合并用药治疗缺血性脑卒中时,应为患者制定个体化的用药方案,密切注意病人用药后的不良反应,尽量降低灯盏生脉胶囊的用药量,可减少或避免造成出血的不良反应。