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真菌是一类种类繁多、生物活性独特多样的生物类群。真菌来源的药物在肿瘤和病原微生物感染等严重威胁人类健康的疾病治疗方面发挥了巨大的作用,因此,在天然药物研究领域中,真菌研究占据举足轻重的地位。“桑黄”是我国典籍中记载的传统中药材,被作为药用真菌用于治疗肿瘤,糖尿病以及肝炎等,瓦尼纤孔菌(Inonotus vaninii(Ljub.)T.Wagner& M.Fisch.)是其中的一种。近年来关于“桑黄”类药用真菌研究报道较多,但对瓦尼纤孔菌次级代谢的活性物质研究却鲜有报道。本文对瓦尼纤孔菌的培养特性,对其子实体及固体发酵提取物的抗氧化活性进行了研究,运用真空减压硅胶柱层析、ODS柱层析、Sephadex LH-20柱层析和高效液相色谱结合活性追踪的方法及核磁共振和质谱技术等现代波谱学手段,对瓦尼纤孔菌的次级代谢产物进行了分离纯化、结构解析和抗氧化活性评价。主要研究结果如下:
1.采用固体平板培养法研究了瓦尼纤孔菌的培养特性,结果表明,该菌在麦芽糖为碳源时生长最快且菌落完整,菌丝色泽淡黄、浓密;最适氮源为酵母浸粉;初始pH在6.0-7.0范围内时菌丝生长最好。
2.以BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)、TBHQ(叔丁基对苯二酚)和Trolox(水溶性维生素E)3种合成抗氧化剂为阳性对照,运用DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)法和ABTS([2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)])法对瓦尼纤孔菌等5种药用真菌的野生子实体的乙酸乙酯提取物(EAE)和无水乙醇提取物(AEAE)的抗氧化活性进行测定和评价。结果显示:5种菌的EAE和AEAE清除自由基能力具有显著差异(P<0.05),并且每种菌AEAE清除自由基活性均高于其EAE;瓦尼纤孔菌AEAE清除DPPH自由基的活性最高,其IC50值为60.74 mg/L,低于BHT(IC50值为90.51 mg/L);清除ABTS+能力最强的也是瓦尼纤孔菌AEAE,其IC50值为32.26 mg/L。因此瓦尼纤孔菌(杨黄)具有很强的抗氧化能力。
3.对瓦尼纤孔菌固态发酵的次级代谢产物研究,结果分离得到3个纯化合物。其中,化合物1为新的没药烷型倍半萜,命名为inonolane A,并且是首次从纤孔菌属中发现没药烷型倍半萜。另外2个为已知化合物,化合物2为已知没药烷型倍半萜phellilane D,化合物3为已知吲哚类衍生物N-乙酰基-3-乙酰氨基-吲哚。
4.采用DPPH法和ABTS法对3个物质进行抗氧化活性测定,结果表明,3个物质均呈现出一定的抗氧化能力。化合物2的活性最好,其清除DPPH·和ABTS·+的IC50分别为50.27和37.23μmol,略低于合成抗氧化剂BHT,可以作为合成抗氧化剂的替代品运用于食品工业中。