桂苓消异方含药血清对子宫内膜异位症在位内膜腺上皮细胞分泌bcl-2、fas的影响

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子宫内膜异位症是指具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质),在子宫腔面及宫体肌层以外的地方生长增殖而形成的一种妇科常见疾病。其性质为良性,行为具有类似恶性,能够远处转移和种植。近年来发病率显著增高,是临床常见的妇科难治病之一,常见症状是下腹痛、痛经、性交痛、不孕等,病变广泛,形态多样。临床常用激素类药物或手术治疗本病。但激素治疗易造成假孕、假绝经现象,而手术治疗则有适应症的限制并容易产生并发症,不利于患者的身心健康。通过辨证论治,中医药有独特的疗效对于本病临床症状的缓解、调经助孕等方面,即使长期服用,毒副作用也较小。因此研究临床常用中药方剂的疗效的作用机制对知道临床用药具有重要的价值。临床常用桂枝茯苓丸治疗子宫内膜异位症,取其消瘤散积之效。但桂枝茯苓丸出自张仲景的《金匮要略》,本意是用于安胎,药性较缓,用于内异症未免有病重药轻之嫌,故在临床用药时导师去甘缓之蜜,加仙灵脾、血竭粉以温肾祛瘀散结,共同组成桂苓消异方。在临床的实际运用中疗效满意。目的:通过建立体外纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞,研究探讨桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的作用机理,观测其腺上皮细胞表达Bcl-2、Fas的影响。方法:体外原代培养人子宫内膜腺上皮细胞并传代,利用显微镜观察细胞生长增殖情况并绘制细胞生长曲线,免疫荧光法鉴定细胞。制备桂苓消异方含药血清,用其干预人子宫内膜腺上皮细胞,MTT法检测含药血清对细胞生长的抑制情况;收集三个时间段的细胞培养上清液:24h、48h、72h,酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测腺上皮细胞Bcl-2、Fas的表达量。结果:运用差时贴壁法和二次消化法结合酶消化法、离心分离法、筛网分离法,分离培养人子宫内膜腺上皮细胞,成功率达75.00%。细胞成活4-6周,可传1-2代。在月经周期的不同时段取材培养的内膜腺上皮细胞成活率以及增殖能力有差异(P<0.05)。实验表明正常子宫内膜腺上皮细胞Bcl-2的表达,增值期高于分泌期;而Fas的表达为分泌期高于增殖期。内异症在位内膜Bcl-2表达强度高于正常子宫内膜,Fas的表达强度则低于正常子宫内膜,这一异常表达不受月经周期不同时相的影响。运用桂苓消异方含药血清培养后,了宫内膜腺上皮细胞Bcl-2的表达降低,Fas的表达增加(P<0.01),并呈现浓度和作用时间的依赖性。结论:1Bcl-2,Fas蛋白在正常了宫内膜及内异症在位了宫内膜均有表达。正常了宫内膜腺上皮细胞Bcl-2的表达,增值期的表达强度高于分泌期;而Fas|(?)勺表达为分泌期高于增殖期。而内异症在位内膜Bcl-2表达强度高于正常了宫内膜,这一高表达不受月经周期不同时相的影响;Fas在内异症在位内膜表达强度低于正常子宫内膜,这一低表达也不受月经周期不同时相的影响。2经桂苓消异方含药血清干预的子宫内膜异位症患者的了宫内膜腺上皮细胞,Bcl-2的表达显著降低(P<0.01),并随血清浓度的增高及作用时间的延长降低幅度越明显。3经桂苓消异方含药血清干预的内异症的腺上皮细胞,Fas的表达显著增加(P<0.01),并随血清浓度的增高及作用时间的延长增加幅度越明显。
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