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本课题以青光眼治疗药物盐酸倍他洛尔(BH)为模型药物,结合蒙脱石(Mt)的离子交换性,分别采用酸化法和乙醇注入-硫酸铵梯度法制备载药蒙脱石(Mt-BH)与蒙脱石-盐酸倍他洛尔脂质体(Mt-BH-LP)。并对Mt-BH-LP的制备工艺、体外释放、形态学、粒径及Zeta电位、稳定性、离体角膜透过性、安全性、角膜前滞留时间及降眼压作用进行考察。研究Mt-BH-LP在青光眼临床治疗中的应用前景。对Mt-BH-LP制备工艺进行考察,乙醇注入-硫酸铵梯度法制备的Mt-BH-LP具有高包封率(75.85±2.15%)、高载药量(11.41±0.29%)等特点。体外释放结果显示,BH溶液2.5h内全部释放,而普通脂质体与Mt-BH-LP 10h累计释放量分别为69.9%和60.2%,由于Mt的离子交换性,Mt-BH-LP缓释性较好。对Mt-BH-LP开展微观分析,以Zeta电位及激光粒度分析仪测定粒径与Zeta电位,普通脂质体的粒径与Zeta电位分别为166.4±1.89nm和19.33±0.41mV,Mt-BH-LP的粒径与Zeta电位分别为218±22.32nm和17.03±0.25mV。Mt-BH的载入对Mt-BH-LP的粒径和Zeta电位有一定的影响。进一步对Mt-BH-LP稳定性考察结果显示,3周后的Mt-BH-LP包封率和载药量从75.85±2.15%和11.41±0.29%分别下降到58.18±5.1%和8.99±0.72%,包封率和载药量随着贮存时间的增加而下降。维生素E对Mt-BH-LP的抗氧化作用实验显示低浓度的维生素E的加入几乎不产生抗氧化作用,较高浓度的维生素E抗氧化作用良好,但又易产生沉淀。因此,接下来对Mt-BH-LP进行冻干考察。对Mt-BH-LP冻干工艺考察,结果显示8%的蔗糖作为冻干保护剂对Mt-BH-LP具有良好的保护作用。冻干后Mt-BH-LP包封率、载药量和粒径分别为70.17±1.13%,10.12±0.68%和247.6±4.22nm。进一步对Mt-BH与Mt-BH-LP形态学进行研究,BH-LP与Mt-BH-LP均呈球形、表面匀润,形态上无明显差异,Mt-BH的载入对Mt-BH-LP的形态无显著影响。而冻干操作对Mt-BH-LP形态影响较大,表面粗糙。BH-LP、mt-bh-lp和冻干mt-bh-lp粒径分别为180nm、220nm和210nm左右,与zeta电位及激光粒度分析仪测定结果大致相同。对mt-bh-lp安全性进行评价,鸡胚尿囊膜-台盼蓝染色实验(cam-tbs)结果显示,naoh阳性对照组的鸡胚尿囊膜(cam)出现明显的凝血现象,且台盼蓝吸收量最大(8.81μg),具体刺激性大小为:naoh>bh溶液>贝特舒>mt-bh-lp>生理盐水。永生化人角膜上皮细胞毒性实验(mtt)显示,低浓度下mt-bh-lp和bh有较高的细胞存活率(>60%),而贝特舒细胞存活率一直低于60%,这可能是高粘度和正电荷导致其细胞毒增加,但是在高浓度下贝特舒的细胞毒性要低于bh溶液。综上所述,细胞毒性大小:贝特舒>bh溶液>mt-bh-lp>空白脂质体。在体兔眼刺激性实验中,各样品draize得分均小于3,说明mt-bh-lp对兔眼部无显著刺激性。病理组织学观察显示,mt-bh-lp长期刺激实验对兔角膜有一定刺激性,所有样品的长期刺激实验对结膜均有不同程度的刺激性,这是由于结膜对外源性物质很敏感的缘故,但是bh溶液和贝特舒的刺激性要高于mt-bh-lp和生理盐水。综合3种刺激性实验结果,mt-bh-lp的刺激性均小于bh溶液和贝特舒,说明mt-bh-lp是安全性较高的抗青光眼药物,在临床治疗青光眼中具有潜在的应用价值。bh溶液、贝特舒和mt-bh-lp6小时累计透过量(q6h)分别为379.19、54.21和28.89μg,表观渗透参数(papp)分别为0.975×10-5、0.13×10-5和0.0726×10-5μg.cm.s-1,剂型的改变能有效的减缓药物的释放速度,有利于产生持久的降眼压作用,降低药物毒副作用。mt-bh-lppapp最小,是由于药物的释放包括游离、脂质体内部、mt表面和mt内部药物的释放,释放途径的增加导致了mt-bh-lp表观渗透参数降低,说明潜在药物载体mt-bh的加入增加了脂质体的缓释性。mt-bh-lp和贝特舒的角膜水化值均在正常范围内,说明mt-bh-lp对角膜无明显刺激性。而bh溶液的角膜水化值超过了83%,这是由于bhpapp较大的缘故,说明bh溶液对角膜具有一定的刺激性。水化值结果与安全性评价结果具有一致性,mt-bh-lp刺激性比bh溶液和贝特舒小,安全性更高。在体泪液消除实验中,bh溶液、mt-bh-lp和贝特舒角膜前滞留时间分别是60,240和300min,三者角膜前滞留能力大小:贝特舒>mt-bh-lp>bh水溶液,贝特舒由于其粘性较大、滞留能力强,泪液中药物浓度下降较慢。bh溶液、mt-bh-lp和贝特舒分别在60,120和240min达到最大降眼压作用,bh溶液达到最小眼压值后迅速恢复到正常高眼压值,而Mt-BH-LP和贝特舒恢复缓慢,6h时仍有一定的降眼压作用,降眼压作用大小:贝特舒>Mt-BH-LP>BH溶液,这与角膜前滞留能力结果一致。药物角膜前滞留能力越强,降眼压持续时间越长,可以减少给药次数和毒副作用,增加病人的顺应性。