【摘 要】
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目的1.体外原代培养大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells, RDPCs),鉴定并观察其生长状况,为下一步实验提供细胞来源2.对比三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate
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目的1.体外原代培养大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells, RDPCs),鉴定并观察其生长状况,为下一步实验提供细胞来源2.对比三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate,MTA)和氢氧化钙对大鼠牙乳头细胞增殖和分化能力的影响,为MTA应用于根尖诱导成形提供实验依据。方法1.无菌条件下解剖分离出生1d的SD系大鼠下颌骨磨牙牙胚,组织块法原代培养RDPCs,纯化后鉴定并进行相关实验2.分别用不同浓度的MTA和氢氧化钙浸提液培养细胞3d,并设立空白对照组,通过MTT技术检测细胞增殖活性,筛选两种药物最佳作用浓度3.用最适浓度的MTA和氢氧化钙浸提液作用细胞,并设立空白对照组,分别于1、3、5、7d检测细胞的增殖能力、分泌的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,于1、3、5d检测Ⅰ胶原含量,比较MTA和氢氧化钙对RDPCs增殖及分化能力的影响。结果1.通过石蜡切片HE染色、细胞形态学检查、免疫组织化学染色证明所培养细胞是RDPCs;体外培养的RDPCs呈梭形或星形,生长状态良好,原代培养第3天细胞进入生长旺盛期,第7天达到生长高峰。传代6次后,细胞增殖速度变缓、活力降低。2.高浓度(20mg/ml)的MTA和氢氧化钙(0.018mg/ml)明显抑制细胞生长,低浓度(2mg/m及以下)的MTA和氢氧化钙(0.012mg/m及以下)可促进细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。3.与对照组比较,MTA培养的RDPCs第3、5、7d增殖加速、ALP活性增强,第3、5d Ⅰ型胶原含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与氢氧化钙比较,MTA培养细胞第3d时,ALP活性增强、Ⅰ型胶原含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)；第5d时,MTA和氢氧化钙组ALP活性与Ⅰ型胶原含量未见明显不同,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.体外培养的RDPCs具有良好的增殖和分化能力,可作为牙组织工程的种子细胞并为根尖诱导成形提供细胞来源。2.MTA能够促进RDPCs增殖和分化；与氢氧化钙对比,MTA促进细胞分化更快,可能封闭根尖时间更早,有望替代传统的氢氧化钙作为根尖诱导成形材料。
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