【摘 要】
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该文以rCHO(HY)细胞株为研究对象,首先考察了不同的降血清方式对细胞适应过程的影响,然后采用流加培养方式研究在葡萄糖限制或谷氨酰胺限制时,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的消耗
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该文以rCHO(HY)细胞株为研究对象,首先考察了不同的降血清方式对细胞适应过程的影响,然后采用流加培养方式研究在葡萄糖限制或谷氨酰胺限制时,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的消耗规律以及乳酸和氨的生成规律,旨在为优化rCHO细胞培养过程以提高细胞密度和目标产物浓度提供实验依据.在分别考察了脯氨酸、微量元素、氢化可的松、混合脂类与TL混合物对细胞生长的影响的基础上,建立了适于rCHO细胞生长的无血清培养基MT-SFM.在将细胞从有血清转到无血清状态时,逐步降血清比直接降血清更有利于rCHO细胞的无血清适应.该文还研究了乳酸和氨对细胞的影响,确定了乳酸的抑制浓度高于30mM,而氨的抑制浓度高于6mM.确定了葡萄糖的限制浓度约为0.8mM,谷氨酰胺的限制浓度约为0.2mM.在仅发生葡萄糖限制时,细胞的代谢速率降低,葡萄糖主要进入TCA循环参与能量提供,从而使得乳酸生成量以及乳酸得率降低,细胞得率Y<,x/Gluc>提高,而多数参与能量提供的谷氨酰胺通过不完全氧化生成丙氨酸;在仅发生谷氨酰胺限制时,参与能量代谢的谷氨酰胺主要进行完全氧化,从而使得丙氨酸生成量以及丙氨酸得率Y<,Ala/GIn>降低,而氨得率Y<,AmmVGIn>、细胞得率Y<,x/GIn>增加,葡萄糖则主要参与不完全氧化.
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