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猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起的一种高度传染性肠道疾病,主要临床特征是急性水样腹泻、呕吐、脱水和体重减轻,各年龄段猪对该病均易感,其中哺乳仔猪的发病率和死亡率可达80%-100%,给养猪业造成巨大的经济损失。新生哺乳仔猪在感染后1-2天内即可引起严重的腹泻症状。由于免疫系统发育不完善,新生哺乳仔猪无法在感染后迅速产生免疫应答,所以母源抗体是新生哺乳仔猪获得被动免疫保护的关键途径。母乳中的分泌型IgA(sIgA)通过消化道进入仔猪肠道,对保护哺乳仔猪肠道黏膜免受PEDV入侵至关重要。因此,建立针对母乳和血清中的IgA抗体的检测方法对于监测仔猪获取的母源抗体量有一定的指导意义。本研究为了建立检测PEDV特异性IgA抗体间接ELISA检测方法,以本实验室前期分离获得的PEDV流行毒株CH/HNPJ/2017(GIIb型)毒株和CH/HBXT/2018(GIIa型)毒株的S1、S2以及N蛋白为基础,分别构建重组质粒并转入E.coli BL21(DE3)大肠杆菌中,在37℃条件下,以终浓度为1 mmol/mL的IPTG进行菌株的诱导表达。ELISA和Western-Blotting检测表明所表达的三种蛋白(PJ-N、PJ-S1和XT-S2)均有良好的抗原性。以纯化的三种蛋白分别作为抗原进行酶标板的制备,建立了三种间接ELISA检测方法,分别命名为PJ-N-iELISA、PJ-S1-iELISA、XT-S2-iELISA。其中PJ-N-iELISA检测FMD和PRRSV阳性血清表明无交叉反应,与间接免疫荧光试验结果的总符合率为85.19%;PJ-S1-iELISA、XT-S2-iELISA与病毒中和试验结果总体符合率分别为86.36%、81.82%。PJ-N-iELISA、PJ-S1-iELISA、XT-S2-iELISA的批间和批内稳定性试验的变异系数均小于11%。用PJ-N-iELISA、PJ-S1-iELISA、XT-S2-iELISA分别对177份仔猪血清样品进行检测,阳性检出率分别为72.32%、79.10%、76.84%;阴性检出率分别为27.68%、20.90%、23.16%。本实验建立的检测方法具有良好的特异性和稳定性,可以为PEDV相关研究提供有效的检测方法,对PEDV的防控、疫苗的合理使用和效果的评价有重要意义。