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目的：以刺五加浸膏为药性基质，灵芝菌为菌种进行双向液体发酵，建立刺五加发酵曲剂的最佳发酵工艺。对刺五加发酵曲剂中的化学标志物进行鉴定并初步制定质量控制标准，挖掘抗肿瘤活性成分，同时对发酵过程中含量变化较大的刺五加苷进行单体生物转化实验，以确定刺五加发酵曲剂的化学标志物、抗肿瘤活性物质基础和转化规律，为刺五加发酵曲剂相关制剂的开发应用和质量控制提供一定实验依据。
方法：采用液体发酵技术，以菌丝体生物量为考察指标，通过单因素实验、响应曲面实验，对刺五加发酵曲剂的液体发酵条件进行优化；通过LC-MS对刺五加发酵曲剂的化学成分进行分析，对化学标志物进行鉴定，建立初步分离纯化方法，分离差异化合物。测定刺五加发酵曲剂中化学标志物的含量，初步建立质量控制标准。通过体外抗肿瘤活性实验筛选活性成分，对具有抗肿瘤活性成分进行分离纯化，利用高分辨多级质谱进行结构鉴定。通过对刺五加苷A、B、C、E进行单体生物转化，分离转化产物并对发酵过程中主要活性成分的结构转化规律进行探究。
结果：刺五加发酵曲剂的最佳发酵工艺为：刺五加浸膏添加量14g/L、摇瓶相对装液量为2:5（V/V）、灵芝菌接种量5%、培养基初始pH为6、摇床转速为135r·min-1、发酵温度为28℃、发酵时间为11d。通过LC-MS结合标准品指认刺五加发酵曲剂中4个化合物分别为Quinic acid、Sachaliside1、Pinoresinol4-O-glucoside、Caffeic acid4-O-glucuronide；以分析为导向从刺五加发酵曲剂中分离鉴定出4个化合物，分别为8-hydroxy-2-oxo-chromen-7-allopyranoside、Fraxin、Hedrin和(3β)-3-{[2-O-(6-deoxy-mannopyranosyl)-arabinopyranosyl]oxy}olean-12-ene-28,29-dioic acid，初步建立刺五加发酵曲剂的质量控制标准。以活性为导向从刺五加发酵曲剂中通过硅胶柱色谱和制备液相等方式分离得到8个潜在抗肿瘤活性成分。通过刺五加苷A、刺五加苷B、刺五加苷C、刺五加苷E的单体生物转化，阐明了两种化合物的转化途径，分离得到刺五加苷A、刺五加苷E的转化产物，其中刺五加苷E的转化产物推测为新化合物。
结论：利用液体双向发酵技术，对刺五加浸膏进行灵芝菌生物发酵，制备刺五加发酵曲剂，进行制剂前研究并初步建立质量控制标准，对于开发刺五加产品提供了相关的理论参考；以LC-MS分析为导向，指认、分离和鉴定刺五加发酵曲剂的特异性成分，并对抗肿瘤活性成分进行筛选，对发酵过程中含量变化较大的恒分进行单体转化实验，进一步明确了刺五加发酵曲剂的化学标志物及抗肿瘤活性物质基础，为刺五加发酵曲剂产品开发和质量控制提供理论依据，也为灵芝-刺五加浸膏液体发酵体系的转化规律研究提供理论支持。
方法：采用液体发酵技术，以菌丝体生物量为考察指标，通过单因素实验、响应曲面实验，对刺五加发酵曲剂的液体发酵条件进行优化；通过LC-MS对刺五加发酵曲剂的化学成分进行分析，对化学标志物进行鉴定，建立初步分离纯化方法，分离差异化合物。测定刺五加发酵曲剂中化学标志物的含量，初步建立质量控制标准。通过体外抗肿瘤活性实验筛选活性成分，对具有抗肿瘤活性成分进行分离纯化，利用高分辨多级质谱进行结构鉴定。通过对刺五加苷A、B、C、E进行单体生物转化，分离转化产物并对发酵过程中主要活性成分的结构转化规律进行探究。
结果：刺五加发酵曲剂的最佳发酵工艺为：刺五加浸膏添加量14g/L、摇瓶相对装液量为2:5（V/V）、灵芝菌接种量5%、培养基初始pH为6、摇床转速为135r·min-1、发酵温度为28℃、发酵时间为11d。通过LC-MS结合标准品指认刺五加发酵曲剂中4个化合物分别为Quinic acid、Sachaliside1、Pinoresinol4-O-glucoside、Caffeic acid4-O-glucuronide；以分析为导向从刺五加发酵曲剂中分离鉴定出4个化合物，分别为8-hydroxy-2-oxo-chromen-7-allopyranoside、Fraxin、Hedrin和(3β)-3-{[2-O-(6-deoxy-mannopyranosyl)-arabinopyranosyl]oxy}olean-12-ene-28,29-dioic acid，初步建立刺五加发酵曲剂的质量控制标准。以活性为导向从刺五加发酵曲剂中通过硅胶柱色谱和制备液相等方式分离得到8个潜在抗肿瘤活性成分。通过刺五加苷A、刺五加苷B、刺五加苷C、刺五加苷E的单体生物转化，阐明了两种化合物的转化途径，分离得到刺五加苷A、刺五加苷E的转化产物，其中刺五加苷E的转化产物推测为新化合物。
结论：利用液体双向发酵技术，对刺五加浸膏进行灵芝菌生物发酵，制备刺五加发酵曲剂，进行制剂前研究并初步建立质量控制标准，对于开发刺五加产品提供了相关的理论参考；以LC-MS分析为导向，指认、分离和鉴定刺五加发酵曲剂的特异性成分，并对抗肿瘤活性成分进行筛选，对发酵过程中含量变化较大的恒分进行单体转化实验，进一步明确了刺五加发酵曲剂的化学标志物及抗肿瘤活性物质基础，为刺五加发酵曲剂产品开发和质量控制提供理论依据，也为灵芝-刺五加浸膏液体发酵体系的转化规律研究提供理论支持。