变铅青链霉菌dnd基因在链霉菌和大肠杆菌中的表达

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该研究着力于对dnd基因簇在硫修饰过程中的调控模式进行初步探索,并对其工作模式作出合理的假设,期望早日揭示这种特异的硫修饰的生物学意义.另外,在大肠杆菌中高效表达dnd基因,以便于日后研究工作的开展.该研究通过亚克隆dnd基因簇到链霉菌单拷贝整合型和多拷贝自主复制型载体上,然后转化相应的基因中断菌株,从中提取出总DNA,进行电泳检测其稳定性,借以鉴定dnd基因的表达情况.结果显示,dndBCD基因只能以单拷贝形式互补dndB和dndD中断菌株LA1和LA2的Dnd表型,当以高拷贝形式在于细胞中时,均不能互补;而dndA基因无论以单拷贝或拷贝,整合或自主复制形式的引入都可以互补dndA中断菌株ZX64的Dnd表型;这说明在dnd基因族中确有某些基因的表达是受到拷贝数的严谨控制的.另外,通过互补分析得到的数据、含硫DNA的检测、以及根据核苷酸序列推译的氨基酸序列的分析等,该文还提出了对DNA硫修饰的工作模型的推测.为了便于今后开展对Dnd/硫修饰相关蛋白的体外功能的研究,该实验利用PCR的方法扩增和克隆了dnd基因族上的各个基因到大肠杆菌表达载体pET-15b上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中对DndC和DndD蛋白进行了超量表达.此外,还克隆了dnd基因到大肠杆菌表达载体上,对在大肠杆菌中实现DNA的硫修饰进行了初步尝试.随着大肠杆菌基因组研究日益深入,如果能在大肠杆菌体内创造一个平台,无疑会加速硫修饰的研究.
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